本研究旨在構(gòu)建褪黑素（melatonin,MLT）合成酶乙酰血清素甲基轉(zhuǎn)移酶（acetylserotonin methytransferase,ASMT）的卵母細(xì)胞特異表達(dá)載體GDF9-ASMT和MLT受體（MTNR1A與MTNR1B）的顆粒（黃體）細(xì)胞特異表達(dá)載體Cyp17-MTNR1A、MTNR1B,以期為進(jìn)一步生產(chǎn)高繁殖力轉(zhuǎn)基因山羊提供載體材料。首先,分別擴(kuò)增出山羊生長(zhǎng)分化因子9 （GDF9）與細(xì)胞色素P450家族17亞家族A成員1（Cyp17a1）啟動(dòng)子序列備用;然后,擴(kuò)增ASMT、MTNR1A及MTNR1B基因CDS全長(zhǎng)序列,并通過(guò)酶切將ASMT連接至GDF9啟動(dòng)子下游,將MTNR1A和MTNR1B連接至Cyp17a1啟動(dòng)子下游,制備出Pro/GDF9-ASMT、Pro/Cyp17-MTNR1A與Pro/Cyp17-MTNR1B表達(dá)元件;最后通過(guò)酶切連接將上述表達(dá)元件整合至pcDNA3.1（+）載體中,從而構(gòu)建出pcDNA3.1-Pro/GDF9-ASMT、pcDNA3.1-Pro/Cyp17-MTNR1A和pcDNA3.1-Pro/Cyp17-MTNR1B真核表達(dá)載體。經(jīng)測(cè)... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2020,47(12)北大核心

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GDF9和Cyp17a1基因的組織表達(dá)譜分析

以山羊基因組為模板進(jìn)行GDF9和Cyp17a1基因啟動(dòng)子的PCR擴(kuò)增,PCR產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳顯示,均在約2 500 bp處出現(xiàn)特異性條帶,條帶的大小與預(yù)期值(2 500 bp)符合(圖2A、2B);經(jīng)測(cè)序證實(shí),擴(kuò)增條帶與GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中GDF9和Cyp17a1基因啟動(dòng)子序列的堿基同源性均為98%(圖2C、2D),這表明山羊GDF9和Cyp17a1基因啟動(dòng)子克隆成功。2.3 目的基因ASMT、MTNR1A、MTNR1B的PCR擴(kuò)增及序列分析

以山羊松果體cDNA為模板,進(jìn)行ASMT和MTNR1A、MTNR1B基因CDS序列的PCR擴(kuò)增,PCR產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳顯示,均在約1 100 bp處出現(xiàn)特異性條帶,條帶的大小與預(yù)期值(ASMT 1 038 bp,MTNR1A 1 101 bp和MTNR1B 1 131 bp)相近(圖3A、3B)。經(jīng)測(cè)序證實(shí),擴(kuò)增條帶與GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中ASMT、MTNR1A和MTNR1B基因的CDS序列堿基同源性分別為98%(圖3C)、98%(圖3D)和99%(圖3E)。這表明目的基因ASMT、MTNR1A、MTNR1B的CDS序列克隆成功。2.4 pcDNA3.1(+)載體骨架的PCR擴(kuò)增

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3118560