腦心肌炎病毒（Encephalomyocarditis virus, EMCV）是一種重要的人畜共患病的病原體,具有公共衛(wèi)生意義。EMCV感染的宿主范圍廣泛,在某些哺乳動物、嚙齒動物、靈長類動物乃至人類可引起腦炎、心肌炎或心肌周圍炎。豬對EMCV最易感,可造成仔豬急性死亡和實質(zhì)器官的廣泛病理損傷,懷孕母豬的流產(chǎn)、產(chǎn)死胎、弱胎、木乃伊胎等繁殖障礙性疾病。已有的研究表明,EMCV感染可誘導(dǎo)宿主細(xì)胞自噬,但病毒蛋白在自噬中的作用以及調(diào)控病毒復(fù)制的分子機(jī)制尚不清楚。本論文研究病毒蛋白參與EMCV誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬和凋亡及其分子機(jī)制,以期為闡明EMCV的致病機(jī)制提供科學(xué)依據(jù)。利用透射電鏡、Western blotting和激光共聚焦免疫熒光等技術(shù)對EMCV病毒蛋白誘導(dǎo)BHK-21細(xì)胞的自噬活性進(jìn)行分析。結(jié)果顯示,EMCV的2C和3D蛋白能在其轉(zhuǎn)染表達(dá)的細(xì)胞胞漿中產(chǎn)生大量的單層膜和雙層膜的自噬體樣囊泡,而且顯著提高了LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ分子的轉(zhuǎn)化及p62分子的降解；在轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中2C和3D蛋白能與LC3呈點狀共定位分布,表明EMCV的2C和3D蛋白參與病毒誘導(dǎo)細(xì)胞自噬的過程。進(jìn)一步研究結(jié)果表明,EM... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：85 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

激光共聚焦免疫勞光分析轉(zhuǎn)染PEGFP-LC3質(zhì)粒的BHK-21細(xì)胞中GFP-U:3蛋白點狀變化

圖3-1 EMCV 2C與Beclini相互作用的驗證K:293T細(xì)胞中共轉(zhuǎn)染pCMV-HA-2C和pCMV-Myc-Beclinl質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染后36 h,收取細(xì)胞蛋白，并用c抗體進(jìn)行免疫共沉淀：B: BHK-21細(xì)胞中轉(zhuǎn)染pCMV-HA-2C質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染后36 h,收取細(xì)胞蛋白，和Beclini抗體進(jìn)行免疫共沉淀。Fig. 3-1 Confirmation of the interaction of EMCV 2C with Beclini

和Myc抗體及相應(yīng)的炎光一抗輕育，并進(jìn)行DAW染色，最后利激光共聚焦顯微鏡觀察蛋內(nèi)在細(xì)胞內(nèi)的分布情況。結(jié)果（圖3-2A)表明，EMCV 2CLj Beclini共定位丁?細(xì)胞質(zhì)中。進(jìn)一步分析2C Beclini在EMCV感染BHK-21細(xì)胞中的共定位情況。EMCV(M01=0.005)感染BHK-21細(xì)胞，同時設(shè)立不接毐的對照組，12h后，/4J抗2C和BecHn丨的抗體及相應(yīng)炎光一抗輕育，并進(jìn)行DAPI染色，最后利用激光共聚焦顯微鏡觀察蚩白在細(xì)胞內(nèi)的分布情況。結(jié)果（圖3-2B)表明，在EMCV感染BHK-21細(xì)胞中，2C能與內(nèi)源性的Beclini共定位丁?細(xì)胞質(zhì)中

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]豬腦心肌炎病毒分離株BJC3全長感染性克隆的構(gòu)建與拯救病毒鑒定[J]. 張國慶,朱書,蓋新娜,郭鑫,陳艷紅,查振林,楊漢春.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報. 2009(09)
[2]豬腦心肌炎病毒中國分離株的致病性分析[J]. 馬良,蓋新娜,張家龍,趙婷,陳艷紅,楊漢春,郭鑫.  中國獸醫(yī)雜志. 2008(01)
[3]豬腦心肌炎病毒的分離與鑒定[J]. 蓋新娜,楊漢春,郭鑫,呂艷麗,王芳,陳艷紅,查振林.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報. 2007(01)
[4]規(guī)模化豬場腦心肌炎病毒感染的血清學(xué)調(diào)查[J]. 張家龍,蓋新娜,馬良,陳艷紅,查振林,郭鑫,楊漢春.  中國獸醫(yī)雜志. 2007(01)
[5]豬腦心肌炎病毒VP1蛋白單克隆抗體的制備及鑒定[J]. 董昕欣,郭鑫,楊漢春,蓋新娜,陳艷紅,查振林.  中國獸醫(yī)科學(xué). 2007(01)
[6]豬腦心肌炎病毒結(jié)構(gòu)蛋白VP1基因的克隆與原核表達(dá)[J]. 蓋新娜,楊漢春,郭鑫,陳艷紅,查振林.  中國獸醫(yī)雜志. 2006(11)

博士論文
[1]豬腦心肌炎病毒VP1基因的原核表達(dá)、血清學(xué)調(diào)查及分離毒株的鑒定[D]. 蓋新娜.中國農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005



本文編號：3113677