為構(gòu)建特異性犬瘟熱病毒（CDV）的納米抗體庫(kù),獲得抗CDV的VHH抗體,本試驗(yàn)利用CDV免疫羊駝,四免后采集外周血淋巴細(xì)胞,提取總RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA,利用巢式PCR擴(kuò)增納米抗體序列。將目的片段連接至pComb3x噬菌體展示載體,并電轉(zhuǎn)至TG1宿主菌,挑取40個(gè)克隆進(jìn)行菌液PCR驗(yàn)證,隨機(jī)挑選13個(gè)陽(yáng)性單克隆進(jìn)行測(cè)序,計(jì)算抗體庫(kù)庫(kù)容量,加入輔助噬菌粒拯救獲得的噬菌體展示抗體庫(kù)。經(jīng)過(guò)3輪淘選,富集對(duì)CDV結(jié)合力高的噬菌體。利用畢赤酵母系統(tǒng)表達(dá)兩株結(jié)合力高的噬菌體,經(jīng)Ni柱純化后,利用ELISA進(jìn)行噬菌體結(jié)合力的鑒定。結(jié)果表明,四免后羊駝血清效價(jià)達(dá)1∶25 000,達(dá)到建庫(kù)要求,構(gòu)建的噬菌體展示文庫(kù)庫(kù)容量達(dá)3.41×10⁹ PFU。經(jīng)過(guò)3輪淘選,特異性抗體庫(kù)經(jīng)稀釋100倍后,ELISA檢測(cè)仍為陽(yáng)性,表明特異性結(jié)合CDV的噬菌體得到明顯的富集。ELISA結(jié)果表明,兩株純化的納米抗體與CDV的反應(yīng)性顯著高于對(duì)照組。以上結(jié)果提示,本研究成功篩選出2株特異性結(jié)合CDV的VHH抗體,為VHH抗體在犬瘟熱的診斷和治療方面的應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。 

【文章來(lái)源】：中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2020,47(06)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：9 頁(yè)

【部分圖文】：

VHH基因PCR擴(kuò)增結(jié)果電泳圖

菌液PCR結(jié)果圖

氨基酸序列比對(duì)分析

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]蘭州地區(qū)犬瘟熱流行病學(xué)調(diào)查及其治療[J]. 祁珊珊,鄭紅星.  中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2009(10)

博士論文
[1]黃曲霉毒素納米抗體研制及其免疫分析技術(shù)研究[D]. 何婷.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2016

碩士論文
[1]羊駝來(lái)源的天然未免疫及免疫后納米抗體文庫(kù)的構(gòu)建[D]. 劉競(jìng)帆.中山大學(xué) 2017



本文編號(hào)：3112423