發(fā)布時(shí)間：2021-03-31 23:13

　　犬細(xì)小病毒�。╟anine parvovirus disease, CPVD）是一種由犬細(xì)小病毒（canine parvovirus,CPV）感染引起的以出血性腸炎或非化膿性心肌炎為主要特征的病毒性傳染病,該病傳播速度快,各種年齡和性別犬均可感染,幼犬的死亡率高達(dá)70%,成年犬隱形帶毒并持續(xù)向外界排毒的現(xiàn)象普遍存在,現(xiàn)已成為危害我國(guó)養(yǎng)犬業(yè)健康發(fā)展的重要傳染病之一,因此,建立快速、準(zhǔn)確的診斷方法對(duì)CPVD的防治至關(guān)重要。本研究旨在制備抗CPV單克隆抗體,建立CPVD雙抗體夾心ELISA和膠體金免疫層析試紙條檢測(cè)方法,為CPVD的快速檢測(cè)和診斷提供幫助。本文內(nèi)容包括以下四個(gè)部分：試驗(yàn)一：犬細(xì)小病毒的分離及其VP2基因分子特征分析從犬細(xì)小病毒病免疫預(yù)防失敗犬體內(nèi)分離到一株犬細(xì)小病毒（CPV）,命名為Js12。該病毒可凝集豬的紅細(xì)胞,對(duì)乙醚不敏感,pH3.0不能滅活病毒,pHH10.0可使病毒失去感染性,56℃作用60min病毒仍有活性,80℃作用30min可使病毒失活。序列分析,JS12屬于CPV-2a亞型,VP2基因全長(zhǎng)1755nt,共編碼584aa,與國(guó)外CPV毒株VP2基因的核苷酸序列... 

【文章來(lái)源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：88 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語(yǔ)
第一篇 文獻(xiàn)綜述 犬細(xì)小病毒病研究進(jìn)展
    1 犬細(xì)小病毒病概況
        1.1 起源和發(fā)展
        1.2 感染宿主范圍
        1.3 流行現(xiàn)狀
        1.4 臨床癥狀
    2 犬細(xì)小病毒病的病原特性
        2.1 形態(tài)特點(diǎn)和生物學(xué)特性
        2.2 培養(yǎng)特性
        2.3 基因組結(jié)構(gòu)與編碼蛋白
        2.4 抗原性
    3 犬細(xì)小病毒病的診斷
        3.1 臨床診斷
        3.2 病毒分離
        3.3 電鏡檢查
        3.4 免疫學(xué)檢測(cè)方法
        3.5 分子生物學(xué)檢測(cè)方法
    4 犬細(xì)小病毒的防控
        4.1 弱毒疫苗
        4.2 滅活疫苗
        4.3 基因工程亞單位疫苗
        4.4 核酸疫苗
    5 犬細(xì)小病毒病的治療
    參考文獻(xiàn)
第二篇 試驗(yàn)研究
    第一章 犬細(xì)小病毒的分離及其VP2基因分子特征分析
        摘要
        1 材料和方法
            1.1 細(xì)胞、毒株和動(dòng)物
            1.2 主要試劑
            1.3 病料采集與處理
            1.4 病毒分離與培養(yǎng)
            1.5 病毒滴度的測(cè)定
            1.6 動(dòng)物發(fā)病試驗(yàn)
            1.7 病毒生物學(xué)特性分析
            1.8 VP2基因的擴(kuò)增
            1.9 VP2基因的克隆
            1.10 VP2基因的序列分析
            1.11 VP2蛋白的立體結(jié)構(gòu)分析
            1.12 VP2蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
            1.13 重組VP2蛋白的抗原性分析
        2 結(jié)果
            2.1 病毒分離與培養(yǎng)
            2.2 病毒滴度的測(cè)定
            2.3 動(dòng)物發(fā)病試驗(yàn)
            2.4 病毒生物學(xué)特性分析
            2.5 VP2基因的擴(kuò)增與克隆
            2.6 VP2基因的序列分析
            2.7 VP2蛋白的立體結(jié)構(gòu)分析
            2.8 VP2蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
            2.9 重組VP2蛋白的抗原性分析
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
        Abstract
    第二章 分泌犬細(xì)小病毒單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株的建立
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 細(xì)胞、病毒和動(dòng)物
            1.2 主要試劑
            1.3 CPV抗原的純化
            1.4 動(dòng)物免疫
            1.5 細(xì)胞融合
            1.6 間接ELISA檢測(cè)方法的建立
            1.7 雜交瘤細(xì)胞株的篩選
            1.8 陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞株的亞克隆
            1.9 單克隆抗體腹水的制備
            1.10 單克隆抗體特異性鑒定
            1.11 單克隆抗體效價(jià)測(cè)定
            1.12 單克隆抗體亞類(lèi)鑒定
            1.13 單克隆抗體抗原識(shí)別位點(diǎn)差異性分析
            1.14 單克隆抗體中和活性測(cè)定
            1.15 雜交瘤細(xì)胞株穩(wěn)定性測(cè)定
        2 結(jié)果
            2.1 CPV抗原的純化
            2.2 間接ELISA檢測(cè)方法的建立
            2.3 單克隆抗體特異性鑒定
            2.4 單克隆抗體效價(jià)測(cè)定
            2.5 單克隆抗體亞類(lèi)鑒定
            2.6 單克隆抗體抗原識(shí)別位點(diǎn)差異性分析
            2.7 單克隆抗體中和活性測(cè)定
            2.8 雜交瘤細(xì)胞株穩(wěn)定性測(cè)定
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
        Abstract
    第三章 犬細(xì)小病毒單克隆抗體夾心ELISA檢測(cè)方法的建立
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 病毒、抗體與動(dòng)物
            1.2 主要試劑
            1.3 單克隆抗體腹水的制備
            1.4 腹水的純化
            1.5 單克隆抗體的標(biāo)記
            1.6 單克隆抗體配對(duì)試驗(yàn)
            1.7 捕獲抗體和酶標(biāo)抗體工作濃度的優(yōu)化
            1.8 夾心ELISA試驗(yàn)條件的優(yōu)化
            1.9 夾心ELISA判定標(biāo)準(zhǔn)的確定
            1.10 特異性檢驗(yàn)
            1.11 敏感性檢驗(yàn)
            1.12 重復(fù)性檢驗(yàn)
            1.13 臨床樣品檢測(cè)
        2 材料與方法
            2.1 單克隆抗體配對(duì)試驗(yàn)
            2.2 捕獲抗體和酶標(biāo)抗體工作濃度的優(yōu)化
            2.3 夾心ELISA試驗(yàn)條件的優(yōu)化
            2.4 夾心ELISA判定標(biāo)準(zhǔn)的確定
            2.5 特異性檢驗(yàn)
            2.6 敏感性檢驗(yàn)
            2.7 重復(fù)性檢驗(yàn)
            2.8 臨床樣品檢測(cè)
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
        Abstract
    第四章 犬細(xì)小病毒單克隆抗體膠體金免疫層析檢測(cè)試紙條的制備
        摘要
        1 材料和方法
            1.1 單抗與病料
            1.2 主要試劑及耗材
            1.3 玻璃器皿的處理
            1.4 單克隆抗體純化
            1.5 膠體金溶液的制備
            1.6 膠體金溶液的鑒定
            1.7 膠體金與抗體的標(biāo)記
            1.8 試紙條的優(yōu)化
            1.9 試紙條的組裝
            1.10 試紙條特性鑒定
            1.11 臨床樣品檢測(cè)
        2 結(jié)果
            2.1 膠體金溶液的鑒定
            2.2 膠體金與抗體的標(biāo)記
            2.3 試紙條的優(yōu)化
            2.4 試紙條特性鑒定
            2.5 臨床樣品檢測(cè)
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
        Abstact
全文總結(jié)
附錄：常用試劑的配制
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文



本文編號(hào)：3112240