山羊生產(chǎn)中,胎盤早期的正常生長和發(fā)育是影響母畜繁殖性能及羔羊品質(zhì)的關鍵因素。滋養(yǎng)層細胞是早期胎盤組織功能體現(xiàn)的主要成分之一,并且在胚胎附植、入侵子宮等過程中起著重要的調(diào)節(jié)作用。TET1（ten-eleven translocation 1）作為去甲基化主導作用的雙加氧酶成員,在哺乳動物早期胎盤發(fā)育、胚胎著床、胎兒生長、基因組印記以及相關信號通路調(diào)控中具有普遍作用。同時,大量研究證實由Wnt分子啟動的Wnt信號通路,廣泛參與細胞命運決定、胎兒發(fā)育和胎盤形成等生命過程。所以,在哺乳動物胎盤發(fā)育過程中,兩者的生理功能、調(diào)控位置和作用階段都具有一定的相似性和同步性。但是,在山羊胎盤滋養(yǎng)層細胞（goat placental trophoblast cells,GTCs）的分化和發(fā)育過程中,TET1是否通過Wnt信號通路相關分子發(fā)揮調(diào)控作用,目前還沒有相關報道。通過建立原代GTCs體外培養(yǎng)體系,過表達及shRNA干擾調(diào)節(jié)GTCs中TET1的表達,研究GTCs的活性和遷移能力,比較Wnt通路相關基因mRNA相對表達量,從轉(zhuǎn)錄表達途徑上揭示GTCs中TET1對Wnt信號通路相關基因的調(diào)控作用,從而研究... 

【文章來源】：西南大學重慶市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

經(jīng)典Wnt/β-catenin信號通路（左）和非經(jīng)典Wnt通路（右）

西南大學碩士學位論文將剪碎的組織塊轉(zhuǎn)入 90 cm2培養(yǎng)皿中，加入 0.1%膠原酶 I 溶液（組織︰膠原酶 I=1︰5），充分混勻，37℃恒溫搖床 70 rpm 消化 40 min，中間可用移液槍離散混勻。培養(yǎng)皿中的組織與細胞混合物轉(zhuǎn)入 15 mL 離心管中，1800 rpm 離心 5 min，棄上清。加入 20% FBS（無菌 PBS 配制）重懸沉淀，終止消化，1800 rpm 離心 5 min，棄上清。加入適量全培養(yǎng)液，用移液槍吹打使沉淀懸浮，將細胞和組織混合液均勻加至 25 cm2培養(yǎng)瓶中。每瓶加入 5 mL 全培養(yǎng)液，于 5% CO2、飽和濕度、37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。2 d 后換液，去除掉懸浮在培養(yǎng)液中的紅細胞和組織等。顯微鏡下觀察細胞形態(tài)及生長狀況。

圖 4-4 RT-qPCR 分析 GTCs 中不同濃度 Dox 處理后 TET1 基因 mRNA 相對表達量.4-4 RT-qPCR of TET1 gene mRNA level in GTCs treated with different concentrations ofP<0.05，**P<0.01，下同*P<0.01, **P<0.01, the same as below

【參考文獻】：
期刊論文
[1]用作交聯(lián)劑的甲醛可改變細胞蛋白質(zhì)譜[J]. 蔣綽,謝力琦,廖日晶,陳付學,吳嘉熙.  中國細胞生物學學報. 2016(08)
[2]Induction of CXC chemokines in human mesenchymal stem cells by stimulation with secreted frizzled-related proteins through non-canonical Wnt signaling[J]. David S Bischoff,Jian-Hua Zhu,Nalini S Makhijani,Dean T Yamaguchi.  World Journal of Stem Cells. 2015(11)
[3]大足黑山羊胎盤子葉性狀和結構及其與繁殖性能的相關性[J]. 羅南劍,管代祿,李黃琨,王燕,趙永聚.  中國獸醫(yī)學報. 2015(08)
[4]TGF-β/BMP signaling and other molecular events: regulation of osteoblastogenesis and bone formation[J]. Md Shaifur Rahman,Naznin Akhtar,Hossen Mohammad Jamil,Rajat Suvra Banik,Sikder M Asaduzzaman.  Bone Research. 2015(01)
[5]綿羊多核絨毛膜滋養(yǎng)層細胞的分離培養(yǎng)與鑒定[J]. 王專家,張宇飛,劉淑英.  細胞與分子免疫學雜志. 2014(01)
[6]綿羊胎盤滋養(yǎng)層細胞的體外培養(yǎng)與鑒定[J]. 劉慧,劉淑英,劉麗珍,張宇飛.  中國獸醫(yī)科學. 2012(03)

博士論文
[1]綿羊胎盤絨毛膜滋養(yǎng)層細胞中enJSRV囊膜蛋白的細胞生物學作用[D]. 張宇飛.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學 2016
[2]苦馬豆素誘導山羊胎盤滋養(yǎng)層細胞凋亡的信號轉(zhuǎn)導通路研究[D]. 董峰.西北農(nóng)林科技大學 2014
[3]1.Doxycycline誘導細胞凋亡及其機制 2.GDNF修飾的人羊膜上皮細胞在大鼠MCAO模型中的治療作用[D]. 武家才.中國科學院研究生院（上海生命科學研究院） 2006

碩士論文
[1]山羊Tet1基因克隆及其在胎盤的表達譜[D]. 熊小燕.西南大學 2016



本文編號：3111957