旨在克隆、表達(dá)馬泰勒蟲(chóng)（Theileria equi）和駑巴貝斯蟲(chóng)（Babesia caballi）半胱氨酸蛋白酶（cystein protease,CP）基因,并對(duì)其進(jìn)行生物信息學(xué)預(yù)測(cè)和分析。提取馬泰勒蟲(chóng)和駑巴貝斯蟲(chóng)的DNA,以此為模板擴(kuò)增目的基因。利用克隆技術(shù)和原核表達(dá)系統(tǒng)克隆表達(dá)CP,用尿素透析法進(jìn)行純化。通過(guò)Dot blot驗(yàn)證其與相應(yīng)陽(yáng)性血清特異性反應(yīng)。應(yīng)用MAGA軟件和Prot Param、TMHMM、SignalP-5.0、Antibody Epitope Prediction、SYFPEITHII、ProPred及EzMol^2.1等在線分析軟件分析T.equi-CP和B.caballi-CP的基因及其蛋白序列。成功構(gòu)建了重組質(zhì)粒GST-T.equi-CP和GST-B.caballi-CP,經(jīng)SDS-PAGE試驗(yàn)結(jié)果顯示該基因表達(dá)的蛋白以包涵體形式高效表達(dá),并能與相應(yīng)陽(yáng)性血清特異性反應(yīng)。對(duì)T.equi-CP和B.caballi-CP基因編碼蛋白進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育分析發(fā)現(xiàn),與其他原蟲(chóng)物種相比,系統(tǒng)發(fā)育分析結(jié)果與其原生動(dòng)物學(xué)分類結(jié)果一致。經(jīng)生物信息學(xué)分析預(yù)測(cè)顯... 

【文章來(lái)源】：畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2020,51(10)北大核心CSCD

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【部分圖文】：

T.equi-CP和B.caballi-CP蛋白的3D模型構(gòu)建

通過(guò) T. equi-CP 基因同源物種氨基酸序列進(jìn)化分析,結(jié)果如圖6所示,本文所研究的T. equi-CP與馬泰勒蟲(chóng)在同一分支上屬于馬泰勒蟲(chóng)半胱氨酸蛋白酶,與其遺傳距離最近的為Theileria equi strain WA(XP_004832412.1);馬泰勒蟲(chóng)半胱氨酸蛋白酶與牛環(huán)形泰勒蟲(chóng)進(jìn)化關(guān)系最近,其次分別為尤氏泰勒蟲(chóng)、東方泰勒蟲(chóng)和小泰勒蟲(chóng),而巴貝斯蟲(chóng)屬自成一支。圖3 誘導(dǎo)時(shí)間及IPTG濃度對(duì)GST-B. caballi-CP蛋白表達(dá)的影響

誘導(dǎo)時(shí)間及IPTG濃度對(duì)GST-B. caballi-CP蛋白表達(dá)的影響

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3109281