雙峰駝是我國西北地區(qū)特有的動物,常年生活在自然環(huán)境較為惡劣的沙漠地帶。已經(jīng)公開的研究表明雙峰駝有著獨特的黏膜免疫系統(tǒng),黏膜免疫系統(tǒng)在抵御外部病原入侵的過程中發(fā)揮著重要的作用,其中T細胞是參與保護反應的一類重要的效應細胞,但是關于雙峰駝T細胞的研究未見報道。因此本文就雙峰駝T細胞表面兩類重要的分子CD3和CD4開展了生物信息學分析,重組蛋白的原核表達和多克隆抗體制備方面的研究。為獲取CD3ε和CD4的重組蛋白和相應的多克隆抗體,首先在GenBank中查找收錄的雙峰駝CD3ε和CD4的核酸序列及氨基酸序列,利用生物信息學分析軟件對CD3ε和CD4的跨膜區(qū),信號肽及抗原指數(shù)和親水性進行了預測,之后選取CD4和CD3ε膜外部分的氨基酸序列,并去除信號肽,人工合成這段氨基酸序列所對應的基因,經(jīng)測序正確的基因片段被克隆至PET-28a（+）表達載體上,轉(zhuǎn)入BL21（DE3）大腸桿菌中,然后誘導重組蛋白表達,SDS-PAGE鑒定重組蛋白。將兩種重組蛋白經(jīng)過鎳柱親和層析純化后分別免疫健康的雄兔以制備多克隆抗體,待四免后心臟采血并提取血清,ELISA檢測CD3ε與CD4多抗的血清效價,WB檢測抗體血清與... 

【文章來源】：甘肅農(nóng)業(yè)大學甘肅省

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

CD3跨膜區(qū)預測

甘肅農(nóng)業(yè)大學2020屆碩士學位論文18圖1-2CD3信號肽預測Fig.1-2CD3preditionofsignalpepited3.2.3抗原指數(shù)及親水性預測預測結果如圖1-3所示。在親水性預測中如果數(shù)值大于0則為疏水性，小于0則為親水性，結果表明該蛋白為疏水性蛋白。在抗原指數(shù)預測中如果數(shù)值大于0則表明抗原指數(shù)高，結果表明該蛋白抗原指數(shù)較高。圖1-3親水性與抗原指數(shù)預測Fig.1-3Predictionofhydrophilicityandantigenindex3.3CD3重組蛋白的誘導表達如圖1-4所示，對CD3重組蛋白大小的預測結果是11Ku，聚丙烯酰胺凝膠電泳顯示在蛋白分子質(zhì)量標準10Ku15Ku條帶之間出現(xiàn)了目的蛋白條帶，最終的結果表明成功獲得了重組蛋白。

甘肅農(nóng)業(yè)大學2020屆碩士學位論文18圖1-2CD3信號肽預測Fig.1-2CD3preditionofsignalpepited3.2.3抗原指數(shù)及親水性預測預測結果如圖1-3所示。在親水性預測中如果數(shù)值大于0則為疏水性，小于0則為親水性，結果表明該蛋白為疏水性蛋白。在抗原指數(shù)預測中如果數(shù)值大于0則表明抗原指數(shù)高，結果表明該蛋白抗原指數(shù)較高。圖1-3親水性與抗原指數(shù)預測Fig.1-3Predictionofhydrophilicityandantigenindex3.3CD3重組蛋白的誘導表達如圖1-4所示，對CD3重組蛋白大小的預測結果是11Ku，聚丙烯酰胺凝膠電泳顯示在蛋白分子質(zhì)量標準10Ku15Ku條帶之間出現(xiàn)了目的蛋白條帶，最終的結果表明成功獲得了重組蛋白。


本文編號：3103108