由于豬戊型肝炎病毒（hepatitis E virus,HEV）可跨種屬感染人,因此,豬群中豬HEV感染的監(jiān)測對于該病的防控和公共衛(wèi)生都具有重要的意義。本試驗旨在建立一種檢測豬HEV抗體的間接ELISA方法,以原核表達純化截短的豬HEV衣殼蛋白為包被抗原,優(yōu)化條件,確定最佳試驗條件,并分析該方法的敏感性、特異性、重復(fù)性,以及與商品化試劑盒的符合率,評價其臨床應(yīng)用價值。SDS-PAGE和Western blot結(jié)果證明抗原蛋白獲得正確表達與純化,并且具有良好的反應(yīng)原性,可以作為后續(xù)建立ELISA方法的包被抗原。通過優(yōu)化ELISA條件,最終確定抗原最佳包被量為200ng·孔-1,血清最佳稀釋度為1∶200,包被緩沖液為碳酸鹽緩沖液（pH 9.6）,封閉液為2.5%的脫脂奶粉,陰陽性判定的臨界值為OD450nm≥0.296。該間接ELISA方法的特異性和敏感性良好,板內(nèi)和板間變異系數(shù)均小于10%,與北京萬泰商品化試劑盒符合率為91.2%。臨床應(yīng)用表明,該方法可應(yīng)用于豬HEV感染豬后抗體消長以及臨床豬血清抗體的檢測。因此,本研究建立的豬HEV抗體間接ELISA檢測方法具有較好的敏感性和特異性,... 

【文章來源】：畜牧獸醫(yī)學報. 2018,49(10)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：9 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 病毒株和血清
    1.2 主要試劑
    1.3 包被抗原的制備
        1.3.1 豬HEV衣殼蛋白C端268個氨基酸在大腸桿菌中的原核表達
        1.3.2 表達蛋白的復(fù)性和純化
        1.3.3 表達蛋白抗原性分析
    1.4 間接ELISA檢測方法的建立
        1.4.1 間接ELISA方法操作步驟
        1.4.2最佳ELISA工作條件的確定
        1.4.3 臨界值的確定
    1.5 特異性試驗
    1.6 敏感性試驗
    1.7 重復(fù)性試驗
    1.8 對比試驗
    1.9 臨床應(yīng)用
2 結(jié)果
    2.1 SDS-PAGE和Western blot分析蛋白的表達和純化
    2.2 抗原最佳包被濃度和血清最佳稀釋度的確定
    2.3 最佳包被緩沖液和封閉液的確定
    2.4 酶標二抗最佳工作濃度的確定
    2.5 臨界值的確定
    2.6 特異性試驗
    2.7 敏感性試驗
    2.8 重復(fù)性試驗
    2.9 與商品化試劑盒符合率試驗
    2.1 0 臨床樣品檢測
3 討論
4 結(jié)論



本文編號：3102396