泰妙菌素（Tiamulin，TML）是一種截短側(cè)耳素類動物專用抗生素，不僅對支原體有極強(qiáng)活性，而且對鏈球菌、金黃色葡萄球菌也有很強(qiáng)的抗菌活性，以較低劑量添加時(shí)能促進(jìn)生長，因此作為獸藥和飼料添加劑被廣泛應(yīng)用。但TML在動物性食品中的殘留可能對人類的健康造成嚴(yán)重的潛在威脅。目前，用于檢測泰妙菌素殘留的方法主要是理化檢測方法，存在樣品處理過程繁瑣，耗時(shí)較長，且需要昂貴的儀器等缺點(diǎn)。本研究根據(jù)TML的分子結(jié)構(gòu)特點(diǎn)成功制備完全抗原并作鑒定；制備了TML多克隆抗體并初步建立了TML免疫學(xué)檢測方法，為TML單克隆抗體的制備奠定了基礎(chǔ)。1、完全抗原的制備與鑒定本研究用混合酸酐法（Mixed anhydride，MA）將半抗原泰妙菌素偶聯(lián)至載體牛血清白蛋白（Bovine serum albumen，BSA）和卵清蛋白（Ovalbumin，OVA）制備了免疫抗原TML-BSA和包被抗原TML-OVA；對制備的免疫原做紫外掃描鑒定和SDS-PAGE凝膠電泳鑒定，根據(jù)SDS-PAGE凝膠電泳圖估算出完全抗原的偶聯(lián)比。結(jié)果顯示，抗原偶聯(lián)成功，估算出的偶聯(lián)比約為1:23.6。用TML-BSA免疫3只BALB/c小... 

【文章來源】：鄭州大學(xué)河南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 抗生素概述
        1.1.1 抗生素簡介
        1.1.2 抗生素發(fā)現(xiàn)歷史
        1.1.3 抗生素作用機(jī)理
        1.1.4 抗生素分類
    1.2 抗生素殘留對人體和環(huán)境的危害
        1.2.1 造成腸道菌群平衡紊亂
        1.2.2 產(chǎn)生過敏反應(yīng)
        1.2.3 對聽力和腎臟的危害
        1.2.4 其它毒害作用
        1.2.5 抗生素對環(huán)境的危害
        1.2.6 耐藥性問題
    1.3 獸藥抗生素殘留對我國動物產(chǎn)品出口的影響
    1.4 獸藥抗生素殘留的原因
    1.5 解決獸藥抗生素殘留問題的對策
        1.5.1 嚴(yán)格執(zhí)行休藥期規(guī)定
        1.5.2 建立并完善我國獸藥殘留檢測系統(tǒng)
    1.6 獸藥抗生素殘留的檢測方法
        1.6.1 理化檢測方法
        1.6.2 微生物學(xué)檢測方法
        1.6.3 免疫學(xué)檢測方法
        1.6.4 三類抗生素檢測方法優(yōu)缺點(diǎn)對比
    1.7 泰妙菌素的介紹
        1.7.1 理化性質(zhì)
        1.7.2 作用特點(diǎn)
        1.7.3 作用機(jī)理
        1.7.4 不良反應(yīng)
        1.7.5 最高殘留限量
        1.7.6 泰妙菌素殘留檢測的研究進(jìn)展
    1.8 完全抗原合成的基本原理
        1.8.1 半抗原的概述
        1.8.2 半抗原的要求
        1.8.3 載體的選擇
        1.8.4 偶聯(lián)方法的選擇
        1.8.5 人工抗原的純化與鑒定
    1.9 ELISA 概述
        1.9.1 ELISA 原理
        1.9.2 常用的 ELISA 方法
    1.10 本研究的目的、意義及主要內(nèi)容
2 泰妙菌素完全抗原的制備及鑒定
    2.1 材料
        2.1.1 主要試劑
        2.1.2 主要儀器和耗材
        2.1.3 主要溶液配制
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)動物
    2.2 方法
        2.2.1 泰妙菌素完全抗原 TML‐BSA 的制備
        2.2.2 包被原的制備
        2.2.3 完全抗原的表征與鑒定
        2.2.4 動物免疫
        2.2.5 間接 ELISA 檢測抗泰妙菌素抗體方法的建立
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 偶聯(lián)物蛋白濃度
        2.3.2 紫外掃描鑒定結(jié)果
        2.3.3 SDS‐PAGE 凝膠電泳鑒定結(jié)果
        2.3.4 小鼠抗血清效價(jià)測定結(jié)果
        2.3.5 小鼠抗血清敏感性測定結(jié)果
    2.4 討論
        2.4.1 關(guān)于偶聯(lián)方法
        2.4.2 關(guān)于完全抗原鑒定及偶聯(lián)比
        2.4.3 關(guān)于載體選擇
        2.4.4 關(guān)于佐劑
        2.4.5 包被原的選擇
        2.4.6 偶聯(lián)率對免疫效果的影響
    2.5 小結(jié)
3 泰妙菌素兔多克隆抗體的制備及免疫學(xué)檢測方法的建立
    3.1 材料
        3.1.1 主要試劑
        3.1.2 主要儀器和耗材
        3.1.3 主要溶液配制
        3.1.4 實(shí)驗(yàn)動物
    3.2 方法
        3.2.1 動物免疫及多抗血清制備
        3.2.2 多抗純化
        3.2.3 多克隆抗體免疫學(xué)特性鑒定
        3.2.4 間接競爭 ELISA 檢測方法的優(yōu)化及鑒定
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 多克隆抗體效價(jià)及敏感性測定結(jié)果
        3.3.2 多克隆抗體特異性鑒定結(jié)果
        3.3.3 抗原包被濃度和抗體工作濃度的確定結(jié)果
        3.3.4 間接競爭 ELISA 標(biāo)準(zhǔn)曲線及檢測范圍
    3.4 討論
        3.4.1 關(guān)于實(shí)驗(yàn)動物及免疫
        3.4.2 關(guān)于多抗和單抗
    3.5 小結(jié)
4 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄：中英文縮略表
致謝
個(gè)人簡歷
學(xué)習(xí)經(jīng)歷
科研經(jīng)歷
所獲獎勵(lì)
發(fā)表論文情況


【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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本文編號：3099994