肌肉抑素（myostatin, MSTN）基因和卵泡抑素（follistatin, FST）基因在哺乳動物的肌肉發(fā)育過程中發(fā)揮著重要的作用。Myostatin是轉(zhuǎn)化生長因子β（transforming growth factor-β, TGF-β）超家族的成員之一,對肌肉的生長發(fā)育具有負(fù)調(diào)控作用。在小鼠、狗、牛和人類中myostatin突變的個體均表現(xiàn)出骨骼肌過度發(fā)育的表型。Follistatin,作為多種TGF-β家族成員的拮抗因子,在骨骼肌中特異過表達(dá)也會導(dǎo)致骨骼肌過度發(fā)育,其表型與myostatin基因敲除的動物相似。豬作為農(nóng)業(yè)生產(chǎn)領(lǐng)域中的重要商品動物,在肉類市場中的需求量高居榜首,其產(chǎn)肉量和肉質(zhì)的好壞決定其經(jīng)濟(jì)價值。由于myostatin和follistatin基因在肌肉發(fā)育方面的顯著調(diào)控作用,兩者逐漸成為農(nóng)業(yè)動物生產(chǎn)領(lǐng)域具有巨大潛力的靶向基因。本實(shí)驗(yàn)室前期通過傳統(tǒng)的基因同源重組方法和轉(zhuǎn)基因方法結(jié)合克隆技術(shù)分別制備了myostatin敲除豬和肌肉特異表達(dá)follistatin的轉(zhuǎn)基因豬。本研究的內(nèi)容是在此基礎(chǔ)上對這兩種基因修飾豬的肌肉發(fā)育進(jìn)行研究,將其作為培育基因改良瘦肉型豬的... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：140 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略詞表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 骨骼肌生長與發(fā)育
        1.1.1 骨骼肌的發(fā)生與肌肉細(xì)胞的分化
        1.1.2 骨骼肌的生長與調(diào)控
        1.1.3 骨骼肌的再生與修復(fù)
    1.2 Myostatin基因在肌肉發(fā)育中的調(diào)控作用
        1.2.1 Myostatin發(fā)現(xiàn)與結(jié)構(gòu)
        1.2.2 Myostatin基因是骨骼肌生長的負(fù)調(diào)控因子
        1.2.3 Myostatin對肌纖維類型和骨骼肌力量的影響
        1.2.4 Myostatin調(diào)控肌肉細(xì)胞的增殖和分化
        1.2.5 Myostatin調(diào)控肌肉細(xì)胞中蛋白質(zhì)的代謝
        1.2.6 Myostatin調(diào)控脂肪的發(fā)育
        1.2.7 Myostatin與肌營養(yǎng)不良癥
        1.2.8 Myostatin基因調(diào)控心肌的發(fā)育
    1.3 Follistatin基因在肌肉發(fā)育中的調(diào)控作用
        1.3.1 Follistatin的發(fā)現(xiàn)與基因結(jié)構(gòu)
        1.3.2 Follistatin在骨骼肌生長中發(fā)揮正向的調(diào)控作用
        1.3.3 Follistatin的不同亞型對骨骼肌發(fā)育的調(diào)控
        1.3.4 Follistatin對肌纖維類型分布和骨骼肌力量的影響
        1.3.5 Follistatin調(diào)控TGF-β超家族的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑
        1.3.6 Follistatin調(diào)控肌肉細(xì)胞的增殖和分化
        1.3.7 Follistatin調(diào)控肌肉細(xì)胞中蛋白質(zhì)的代謝
        1.3.8 Follistatin調(diào)控脂肪的發(fā)育
        1.3.9 Follistatin對心肌生長發(fā)育的調(diào)控
    1.4 利用轉(zhuǎn)基因或基因重組技術(shù)改良家畜動物的研究進(jìn)展
        1.4.1 應(yīng)用于家畜動物的轉(zhuǎn)基因和基因重組技術(shù)
        1.4.2 基因重組技術(shù)在大型家畜動物的應(yīng)用
    1.5 本課題的研究意義和創(chuàng)新性分析
第二章 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動物
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑和耗材
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 組織基因組的提取
        2.2.2 組織RNA的提取
        2.2.3 組織蛋白的提取
        2.2.4 PCR反應(yīng)及條件
        2.2.5 Southern Blot
        2.2.6 反轉(zhuǎn)錄的反應(yīng)體系及條件
        2.2.7 實(shí)時定量PCR（Real Time PCR）反應(yīng)及條件
        2.2.8 cDNA 3’末端的快速擴(kuò)增（3'RACE）
        2.2.9 BCA法檢測蛋白濃度
        2.2.10 酶聯(lián)免疫吸附分析（ELISA）
        2.2.11 Western Blot
        2.2.12 組織切片制作
        2.2.13 HE染色
        2.2.14 ATPase染色
        2.2.15 解剖及稱重
        2.2.16 肉質(zhì)檢測
        2.2.17 蛋白組檢測iTRAQ
    2.3 分析軟件和成像系統(tǒng)
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
    3.1 Myostatin基因敲除豬的骨骼肌發(fā)育研究
        3.1.1 Myostatin基因敲除豬的基因型鑒定
        3.1.2 Myostatin基因在敲除豬中的轉(zhuǎn)錄分析
        3.1.3 Myostatin基因在敲除豬骨骼肌中的翻譯情況分析
        3.1.4 Myostatin基因敲除豬的生產(chǎn)性狀的檢測結(jié)果與分析
        3.1.5 Myostatin基因敲除豬的肉質(zhì)分析
        3.1.6 Myostatin雙等位基因敲除豬的異常表型
        3.1.7 結(jié)果分析與討論
    3.2 肌肉特異表達(dá)follistatin轉(zhuǎn)基因豬骨骼肌的相關(guān)研究
        3.2.1 肌肉特異表達(dá)follistatin轉(zhuǎn)基因豬的鑒定
        3.2.2 外源follistatin基因在轉(zhuǎn)基因豬體內(nèi)的表達(dá)分析
        3.2.3 轉(zhuǎn)基因豬的生產(chǎn)性狀的檢測結(jié)果與分析
        3.2.4 轉(zhuǎn)基因豬的骨骼肌纖維的分析
        3.2.5 轉(zhuǎn)基因豬的骨骼肌組織中相關(guān)信號分子的檢測
        3.2.6 轉(zhuǎn)基因豬的骨骼肌的蛋白組學(xué)測定結(jié)果及分析
        3.2.7 轉(zhuǎn)基因豬的心肌纖維和繁殖能力的檢測結(jié)果
        3.2.8 轉(zhuǎn)基因豬的肉質(zhì)分析
        3.2.9 結(jié)果分析與討論
第四章 結(jié)論與展望
    4.1 實(shí)驗(yàn)結(jié)論
        4.1.1 關(guān)于myostatin基因敲除豬
        4.1.2 關(guān)于肌肉特異表達(dá)follistatin轉(zhuǎn)基因豬
    4.2 展望
        4.2.1 關(guān)于myostatin基因敲除豬
        4.2.2 關(guān)于肌肉特異表達(dá)follistatin轉(zhuǎn)基因豬
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄
個人簡歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]Efficient production of omega-3 fatty acid desaturase （sFat-1）-transgenic pigs by somatic cell nuclear transfer[J]. PAN DengKe1, ZHANG Li1, ZHOU YanRong2, FENG Chong1, LONG Chuan1, LIU Xiao1, WAN Rong3, ZHANG Jian3, LIN AiXing3, DONG EnQiu4, WANG ShuChen4, XU HouGang4 & CHEN HongXing2 1 Institute of Animal Sciences, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100193, China; 2 Beijing Institute of Biotechnology, Beijing 100071, China; 3 China Agricultural University, Beijing 100193, China; 4 Yutian Breeding Swine Farms, Yutian 064104, China.  Science China（Life Sciences）. 2010(04)
[3]卵泡抑素相關(guān)蛋白的病理生理功能[J]. 申華,劉宇揚(yáng).  生理科學(xué)進(jìn)展. 2009(04)



本文編號：3098653