奶牛乳腺炎主要是由病原菌引起的一種炎癥反應(yīng),大腸桿菌是導(dǎo)致乳腺炎發(fā)生的常見細(xì)菌之一。嗜中性粒細(xì)胞是炎癥反應(yīng)的第一效應(yīng)者,可抵御病原菌侵襲。細(xì)菌侵入乳腺后,嗜中性粒細(xì)胞被招募且快速遷移至炎癥部位吞噬細(xì)菌清除病原。DNA甲基化在炎癥的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮調(diào)控作用,并且與疾病易感性密切相關(guān)。鑒于此,本研究以半同胞健康和大腸桿菌乳腺炎奶牛為模型,進(jìn)行如下研究:對(duì)血液嗜中性粒細(xì)胞進(jìn)行DNA甲基化和RNA-seq測(cè)序;整合轉(zhuǎn)錄組和甲基化數(shù)據(jù),篩選與炎癥、免疫和防御反應(yīng)相關(guān)的基因;通過亞硫酸鹽測(cè)序和實(shí)時(shí)熒光定量PCR驗(yàn)證基因甲基化和表達(dá)水平,鑒定調(diào)控基因表達(dá)的甲基化位點(diǎn),挖掘出與奶牛乳腺炎癥反應(yīng)相關(guān)的表觀遺傳學(xué)標(biāo)記,揭示DNA甲基化在乳腺炎感染過程中發(fā)揮作用的分子機(jī)制,為奶牛乳腺炎的分子育種和治療提供新證據(jù)。主要研究結(jié)果如下:（1）根據(jù)體細(xì)胞數(shù)測(cè)定、血液學(xué)分析和細(xì)菌學(xué)鑒定等實(shí)驗(yàn)篩選6頭半同胞配對(duì)的健康奶牛（HC組,n=3）和大腸桿菌感染的乳腺炎奶牛（MC組,n=3）作為實(shí)驗(yàn)?zāi)膛�。采用�?jiǎn)化甲基化測(cè)序技術(shù)分析了血液嗜中性粒細(xì)胞全基因組甲基化模式,繪制了染色體范圍的全基因組甲基化圖譜。鑒定出兩組樣品中的基... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：129 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

牛血液分離的白細(xì)胞（85%PMN）的細(xì)胞離心涂片

圖 1-3 亞硫酸鹽測(cè)序原理[58]Fig. 1-3 The principle of bisulfite sequencin疫共沉淀技術(shù)（MeDIP）共沉淀技術(shù)，是利用甲基化胞嘧啶特異于染色體或全基因組分析（見圖 1-4）審查整個(gè)基因組中的甲基化水平，用范圍的 DNA 甲基化動(dòng)態(tài)模式[60]。

圖 1-3 亞硫酸鹽測(cè)序原理[58]Fig. 1-3 The principle of bisulfite sequencing疫共沉淀技術(shù)（MeDIP）共沉淀技術(shù)，是利用甲基化胞嘧啶特異用于染色體或全基因組分析（見圖 1-4）[以審查整個(gè)基因組中的甲基化水平，用于組范圍的 DNA 甲基化動(dòng)態(tài)模式[60]。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]DNA甲基化在奶牛金黃色葡萄球菌性乳房炎中的調(diào)控[J]. 劉利,高雪,高會(huì)江,張路培,李俊雅,許尚忠.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2012(10)

博士論文
[1]奶牛金葡菌乳房炎抗性的全基因組DNA甲基化表達(dá)調(diào)控及候選基因功能驗(yàn)證[D]. 宋敏艷.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017



本文編號(hào)：3096817