奶牛乳腺炎主要是由病原菌引起的一種炎癥反應,大腸桿菌是導致乳腺炎發(fā)生的常見細菌之一。嗜中性粒細胞是炎癥反應的第一效應者,可抵御病原菌侵襲。細菌侵入乳腺后,嗜中性粒細胞被招募且快速遷移至炎癥部位吞噬細菌清除病原。DNA甲基化在炎癥的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮調控作用,并且與疾病易感性密切相關。鑒于此,本研究以半同胞健康和大腸桿菌乳腺炎奶牛為模型,進行如下研究:對血液嗜中性粒細胞進行DNA甲基化和RNA-seq測序;整合轉錄組和甲基化數(shù)據(jù),篩選與炎癥、免疫和防御反應相關的基因;通過亞硫酸鹽測序和實時熒光定量PCR驗證基因甲基化和表達水平,鑒定調控基因表達的甲基化位點,挖掘出與奶牛乳腺炎癥反應相關的表觀遺傳學標記,揭示DNA甲基化在乳腺炎感染過程中發(fā)揮作用的分子機制,為奶牛乳腺炎的分子育種和治療提供新證據(jù)。主要研究結果如下:（1）根據(jù)體細胞數(shù)測定、血液學分析和細菌學鑒定等實驗篩選6頭半同胞配對的健康奶牛（HC組,n=3）和大腸桿菌感染的乳腺炎奶牛（MC組,n=3）作為實驗奶牛。采用簡化甲基化測序技術分析了血液嗜中性粒細胞全基因組甲基化模式,繪制了染色體范圍的全基因組甲基化圖譜。鑒定出兩組樣品中的基... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

牛血液分離的白細胞（85%PMN）的細胞離心涂片

圖 1-3 亞硫酸鹽測序原理[58]Fig. 1-3 The principle of bisulfite sequencin疫共沉淀技術（MeDIP）共沉淀技術，是利用甲基化胞嘧啶特異于染色體或全基因組分析（見圖 1-4）審查整個基因組中的甲基化水平，用范圍的 DNA 甲基化動態(tài)模式[60]。

圖 1-3 亞硫酸鹽測序原理[58]Fig. 1-3 The principle of bisulfite sequencing疫共沉淀技術（MeDIP）共沉淀技術，是利用甲基化胞嘧啶特異用于染色體或全基因組分析（見圖 1-4）[以審查整個基因組中的甲基化水平，用于組范圍的 DNA 甲基化動態(tài)模式[60]。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]DNA甲基化在奶牛金黃色葡萄球菌性乳房炎中的調控[J]. 劉利,高雪,高會江,張路培,李俊雅,許尚忠.  畜牧獸醫(yī)學報. 2012(10)

博士論文
[1]奶牛金葡菌乳房炎抗性的全基因組DNA甲基化表達調控及候選基因功能驗證[D]. 宋敏艷.中國農(nóng)業(yè)大學 2017



本文編號：3096817