發(fā)布時(shí)間：2021-03-23 21:18

　　鴨腸炎病毒（Duck enteritis virus,DEV）為皰疹病毒科成員,可引起鴨、鵝等水禽發(fā)生鴨病毒性腸炎（Duck virus enteritis,DVE）,對(duì)水禽養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展造成嚴(yán)重威脅,但其致病機(jī)理尚未完全清楚。NF-κB信號(hào)通路是動(dòng)物機(jī)體的重要信號(hào)通路,在病原體感染、免疫應(yīng)答和炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用,且影響多種炎性介質(zhì)如TNF-a、IL-1β、IL-8以及黏附因子的分泌。本實(shí)驗(yàn)室曾采用RNA干擾技術(shù)開展NF-κB信號(hào)分子對(duì)DEV增殖的影響,本研究則從另一個(gè)角度即采用NF-κB通路的激活劑和抑制劑探索NF-κB通路對(duì)DEV增殖的影響,以期為DEV致病機(jī)理提供基礎(chǔ)資料和新的思路。1.NF-κB1基因熒光定量PCR方法的建立:根據(jù)NF-κB1基因序列設(shè)計(jì)特異性引物,以鴨胚成纖維細(xì)胞mRNA提取樣本為模板,進(jìn)行NF-κB1基因的熒光定量PCR檢測(cè),構(gòu)建熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線并進(jìn)行特異性、重復(fù)性和敏感性檢驗(yàn),結(jié)果顯示:建立的NF-κB1基因熒光定量PCR方法的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=-3.12x+44.086,擴(kuò)增效率為109.2%;其熔解曲線呈特異性單峰,批內(nèi)重復(fù)變異系數(shù)小于0.... 

【文章來(lái)源】：貴州大學(xué)貴州省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：95 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

1NF-κB1基因PCR擴(kuò)增結(jié)果

M. 分子量標(biāo)準(zhǔn) DL2000；1~12.NF-κB 基因重組質(zhì)粒；-.陰性arker DL2000；1~12.Recombinant plasmid of NF-κB gene；-: 圖 3.1.2 NF-κB 基因重組質(zhì)粒 PCR 鑒定結(jié)果Fig. 3.1.2 The PCR identification results of pMD-NF線建立結(jié)果退火溫度進(jìn)行優(yōu)化，退火溫度從 50~65℃以 2、Ct 值最小且在熔解曲線為特異性單峰時(shí)為℃時(shí)所測(cè) Ct 值最低，反應(yīng)體系最優(yōu)。取標(biāo)準(zhǔn)R 檢測(cè)，結(jié)果可見熒光定量 PCR 擴(kuò)增曲線呈曲線呈現(xiàn)平行，Ct 值相差均勻，不同梯度稀釋良好的線性關(guān)系。擴(kuò)增效率為 109.2%，以 Ct 取連續(xù)的五個(gè)點(diǎn)(1.79×107～1.79×1011)獲得熒光(y)與起始拷貝數(shù)(x)關(guān)系式為 y = -3.12x + 44.0 PCR 產(chǎn)物熔解曲線為單特異峰，熔解溫度 Tm

圖 3.1.3 NF-κB 基因標(biāo)準(zhǔn)曲線建立相關(guān)曲線Fig.3.1.3 Establishment of NF-κB gene standard curve量方法特異性分析的 NF-κB1 基因的熔解曲線沒(méi)有出現(xiàn)非特異性的擴(kuò)增產(chǎn)物以及引出現(xiàn)單峰，表示針對(duì)該基因的引物具有良好的特異性(見圖 3.1.4

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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[2]感染金黃色葡萄球菌后小尾寒羊乳腺組織及外周血中TLRs和CK的表達(dá)[D]. 陳佳佳.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018
[3]GRP78通過(guò)NF-κB信號(hào)通路調(diào)控FAT10表達(dá)影響肝癌細(xì)胞增殖的研究[D]. 駱成林.南昌大學(xué) 2018
[4]基于ipaJ基因鑒定雞白痢沙門菌PCR方法的建立及IpaJ抑制宿主NF-κB信號(hào)通路機(jī)制的研究[D]. 徐黎娟.揚(yáng)州大學(xué) 2018
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[6]NF-κB信號(hào)通路在原花青素拮抗砷誘導(dǎo)的BEAS-2B細(xì)胞炎性損傷中的作用研究[D]. 魏猛.石河子大學(xué) 2017
[7]脂多糖激活TLR4信號(hào)通路對(duì)BMP9誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的影響研究[D]. 郭楊柳.重慶醫(yī)科大學(xué) 2017
[8]弓形蟲抗原調(diào)節(jié)NF-κB信號(hào)通路的機(jī)制研究[D]. 范思婕.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[9]鴨坦布蘇病毒激活NF-κB并誘導(dǎo)IFN-β的信號(hào)通路的分子機(jī)制研究[D]. 翟亞軍.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[10]大腸桿菌感染對(duì)仔兔小腸氧化還原狀態(tài)及TLR4/NF-κB信號(hào)通路的影響[D]. 于小婷.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015



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