豬巨細胞病毒病是由致豬發(fā)病的豬巨細胞病毒（Porcine Cytomegalovirus, PCMV）引起的種條件性傳染病。長期以來由于對該病研究不夠深入,其對豬群的危害性沒有得到足夠關注。但近年來研究發(fā)現(xiàn)該病毒主要在豬肺泡巨噬細胞中增殖破壞機體免疫系統(tǒng),造成機體感染后抵抗力降低,易并發(fā)和繼發(fā)其他病原體（如豬藍耳病）感染,PCMV對養(yǎng)豬業(yè)的危害逐漸引起了行業(yè)人士的高度重視。因此,開展該病的快速診斷方法研究和流行病學調(diào)查,對降低該病對養(yǎng)豬業(yè)的危害具有重要意義。本研究應用基因工程技術對PCMV的DNA聚合酶基因特異性片段進行克隆和序列測定；大量比對GenBank中PCMV DNA聚合酶基因序列,設計PCR和熒光定量PCR（FQ-PCR）特異性引物和TaqMan熒光探針,優(yōu)化反應條件,建立PCMVPCR和FQ-PCR檢測方法并對該方法的敏感性、特異性和重復性進行驗證,對疑似PCMV感染的臨床樣品采采用FQ-PCR方法進行應用檢測,同時與常規(guī)PCR方法進行對比實驗,對檢測結果為PCMV陽性豬的不同組織器官和血清進行病毒含量測定；對2009年～2011年河南省部分豬群進行了PCMV感染和混合感染... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)大學北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：87 頁

【學位級別】：博士

【圖文】：

一，巨細胞?

1.1.1.4抵抗力巨細胞病^^易被酸制劑、胎溶劑、紫外線滅活，乙酸、氣仿丨打機溶削處理可使巨細胞病毒喪火感染力。排山豬體外的豬巨細胞病屯抵抗力弱，表面活性類消毋藥物就存消毋效見。豬巨細胞病:?在-8(rc條件下可存活一年以上，L々期保存的最適合溫度娃-196°C (液減）；-7(rc反S凍融3次仍J%存感染力，在37°C條件'卜4小時仍A.冇感染力；37°C保持24小時則火去感染力；50°C時20分鐘不失去感染力，但30分鐘后則火去活性135)61。1.1.1.5病毒培養(yǎng)豬巨細胞病毒在體外增殖JV有一定難度，采W豬丨；？或豬寧丸原代細胞、末梢血液中的巨哩細胞以及豬賢傳代細胞培養(yǎng)，均不能增殖，但S接叫已感染了病毒的豬或?qū)幫枳骷毎麕Ф九囵B(yǎng)，則可充分增殖，開出現(xiàn)細胞病變[37]。豬巨細胞病毒可在肺泡巨哩細胞中生L<：增殖，丨H沒有被病毋污染的3周齡至5周齡豬的肺泡巨哩細胞進行培養(yǎng)，可100%地分離山豬巨細胞病島，但病毒增殖速度非常緩慢[38]，接種后3天?4大才可看到巨細胞形成和核內(nèi)包涵體，偶爾還可見細胞衆(zhòng)內(nèi)包涵體，但其人小比核內(nèi)包涵體耍小。在接種11天?14天后，豬巨細胞病.?的最高滴度可達105.5TClD50/ml。然而，由于肺泡巨噴細胞0身不能繁殖，培養(yǎng)較W難，受到包括豬巨細胞病毒和高致病性豬藍耳病病島在|^_1的病35污染，閃此在肺泡巨啦細胞分離使丨H之前必須對豬巨細胞病

圖2- 3 PCMV重組質(zhì)粒酶切鑒定結果IVLDNA標準DL 100；丨-2.質(zhì)粒酶切Fig.2-3 Recombinant plasmid of pGEM-T/PCMV digested with restrictM..DNA Marker DL 100; 1-2.Plasmid digested by EcoR I胞病毒DNA聚合酶基因序列測定

【參考文獻】：
期刊論文
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[6]四川省豬巨細胞病毒病感染調(diào)查及分析[J]. 劉驍,徐志文,周遠程,王燕群,史小紅.  豬業(yè)科學. 2013(01)
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碩士論文
[1]豬巨細胞病毒gB間接阻斷ELISA方法的建立及在四川省的流行病學調(diào)查[D]. 劉驍.四川農(nóng)業(yè)大學 2012
[2]豬巨細胞病毒gB基因克隆、原核表達及抗血清的制備[D]. 王慧.揚州大學 2012
[3]豬巨細胞病毒囊膜糖蛋白B重組抗原的研制及應用[D]. 李晶.湖南農(nóng)業(yè)大學 2009
[4]豬致病性鏈球菌快速檢測方法的建立及應用[D]. 拜廷陽.西北農(nóng)林科技大學 2007
[5]基于TaqMan探針的豬圓環(huán)病毒2型熒光定量PCR檢測方法的建立及應用[D]. 張福良.西北農(nóng)林科技大學 2006
[6]綠色熒光蛋白表達的重組巨細胞病毒的構建及抗巨細胞病毒藥物篩選[D]. 張曉梅.山東大學 2005



本文編號：3096083