豬巨細(xì)胞病毒病是由致豬發(fā)病的豬巨細(xì)胞病毒（Porcine Cytomegalovirus, PCMV）引起的種條件性傳染病。長(zhǎng)期以來(lái)由于對(duì)該病研究不夠深入,其對(duì)豬群的危害性沒(méi)有得到足夠關(guān)注。但近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)該病毒主要在豬肺泡巨噬細(xì)胞中增殖破壞機(jī)體免疫系統(tǒng),造成機(jī)體感染后抵抗力降低,易并發(fā)和繼發(fā)其他病原體（如豬藍(lán)耳病）感染,PCMV對(duì)養(yǎng)豬業(yè)的危害逐漸引起了行業(yè)人士的高度重視。因此,開(kāi)展該病的快速診斷方法研究和流行病學(xué)調(diào)查,對(duì)降低該病對(duì)養(yǎng)豬業(yè)的危害具有重要意義。本研究應(yīng)用基因工程技術(shù)對(duì)PCMV的DNA聚合酶基因特異性片段進(jìn)行克隆和序列測(cè)定；大量比對(duì)GenBank中PCMV DNA聚合酶基因序列,設(shè)計(jì)PCR和熒光定量PCR（FQ-PCR）特異性引物和TaqMan熒光探針,優(yōu)化反應(yīng)條件,建立PCMVPCR和FQ-PCR檢測(cè)方法并對(duì)該方法的敏感性、特異性和重復(fù)性進(jìn)行驗(yàn)證,對(duì)疑似PCMV感染的臨床樣品采采用FQ-PCR方法進(jìn)行應(yīng)用檢測(cè),同時(shí)與常規(guī)PCR方法進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn),對(duì)檢測(cè)結(jié)果為PCMV陽(yáng)性豬的不同組織器官和血清進(jìn)行病毒含量測(cè)定；對(duì)2009年～2011年河南省部分豬群進(jìn)行了PCMV感染和混合感染... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：87 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【圖文】：

一，巨細(xì)胞?

1.1.1.4抵抗力巨細(xì)胞病^^易被酸制劑、胎溶劑、紫外線滅活，乙酸、氣仿丨打機(jī)溶削處理可使巨細(xì)胞病毒喪火感染力。排山豬體外的豬巨細(xì)胞病屯抵抗力弱，表面活性類(lèi)消毋藥物就存消毋效見(jiàn)。豬巨細(xì)胞病:?在-8(rc條件下可存活一年以上，L々期保存的最適合溫度娃-196°C (液減）；-7(rc反S凍融3次仍J%存感染力，在37°C條件'卜4小時(shí)仍A.冇感染力；37°C保持24小時(shí)則火去感染力；50°C時(shí)20分鐘不失去感染力，但30分鐘后則火去活性135)61。1.1.1.5病毒培養(yǎng)豬巨細(xì)胞病毒在體外增殖JV有一定難度，采W豬丨；？或豬寧丸原代細(xì)胞、末梢血液中的巨哩細(xì)胞以及豬賢傳代細(xì)胞培養(yǎng)，均不能增殖，但S接叫已感染了病毒的豬或?qū)幫枳骷?xì)胞帶毒培養(yǎng)，則可充分增殖，開(kāi)出現(xiàn)細(xì)胞病變[37]。豬巨細(xì)胞病毒可在肺泡巨哩細(xì)胞中生L<：增殖，丨H沒(méi)有被病毋污染的3周齡至5周齡豬的肺泡巨哩細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，可100%地分離山豬巨細(xì)胞病島，但病毒增殖速度非常緩慢[38]，接種后3天?4大才可看到巨細(xì)胞形成和核內(nèi)包涵體，偶爾還可見(jiàn)細(xì)胞衆(zhòng)內(nèi)包涵體，但其人小比核內(nèi)包涵體耍小。在接種11天?14天后，豬巨細(xì)胞病.?的最高滴度可達(dá)105.5TClD50/ml。然而，由于肺泡巨噴細(xì)胞0身不能繁殖，培養(yǎng)較W難，受到包括豬巨細(xì)胞病毒和高致病性豬藍(lán)耳病病島在|^_1的病35污染，閃此在肺泡巨啦細(xì)胞分離使丨H之前必須對(duì)豬巨細(xì)胞病

圖2- 3 PCMV重組質(zhì)粒酶切鑒定結(jié)果IVLDNA標(biāo)準(zhǔn)DL 100；丨-2.質(zhì)粒酶切Fig.2-3 Recombinant plasmid of pGEM-T/PCMV digested with restrictM..DNA Marker DL 100; 1-2.Plasmid digested by EcoR I胞病毒DNA聚合酶基因序列測(cè)定

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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[3]豬巨細(xì)胞病毒囊膜糖蛋白B重組抗原的研制及應(yīng)用[D]. 李晶.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009
[4]豬致病性鏈球菌快速檢測(cè)方法的建立及應(yīng)用[D]. 拜廷陽(yáng).西北農(nóng)林科技大學(xué) 2007
[5]基于TaqMan探針的豬圓環(huán)病毒2型熒光定量PCR檢測(cè)方法的建立及應(yīng)用[D]. 張福良.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2006
[6]綠色熒光蛋白表達(dá)的重組巨細(xì)胞病毒的構(gòu)建及抗巨細(xì)胞病毒藥物篩選[D]. 張曉梅.山東大學(xué) 2005



本文編號(hào)：3096083