發(fā)布時間：2021-03-22 01:53

　　馬病毒性動脈炎（Equine viral arteritis,EVA）是由馬動脈炎病毒（Equine arteritis virus,EAV）引起的，在馬屬動物中通過生殖道和呼吸道途徑傳播的一種傳染病。本研究以引進(jìn)參考毒株Bucyrus株為基礎(chǔ)毒株，通過病毒培養(yǎng)，提取RNA并通過RT-PCR獲得了N基因，用原核表達(dá)載體pET32a構(gòu)建重組質(zhì)粒pET32a-N并轉(zhuǎn)化Rosetta（DE3）。通過對表達(dá)條件的不斷優(yōu)化，N蛋白最終以90%上清形式表達(dá)，并用鎳柱進(jìn)行純化。經(jīng)Western blot鑒定N蛋白免疫原性良好，可作為免疫原用于單抗的制備。將純化的N蛋白作為免疫原，免疫4-6周齡雌性BALB/c小鼠，通過細(xì)胞融合技術(shù)制備了5株單抗，分別命名為1C11、2B1、2B3、3F11、8C4。經(jīng)3次克隆化培養(yǎng)后，Western blot、間接免疫熒光和間接ELISA鑒定該5株單抗均針對N蛋白，而不與His標(biāo)簽反應(yīng)。經(jīng)競爭活性檢測，單抗2B3、8C4具有良好的競爭活性，可用于競爭ELISA方法的建立。將2株競爭活性的單抗擴(kuò)大培養(yǎng)，制備腹水，通過效價和親和力對腹水進(jìn)行評價，最終選用單抗8C4用于診... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

N基因的擴(kuò)增Fig.2.1AmplificationofNgene

圖 2.2 重組質(zhì)粒 pET-N 的 PCR 和酶切鑒定.2 Identification of the recombinant plasmid pET-N by PCR and restricted e000 DNA Marker ; 1: pET-N digested with BamHⅠand SalⅠ2: pET-N ideMarker DL2000SDS-PAGE 分析陽性的重組質(zhì)粒 pET32a-N 轉(zhuǎn)化 Rosetta（DE3）感受態(tài)，挑菌導(dǎo)，誘導(dǎo)完畢后對菌液超聲破碎并純化，純化后對其進(jìn)行到清晰地目的條帶（圖 2.3）。

圖 2.2 重組質(zhì)粒 pET-N 的 PCR 和酶切鑒定on of the recombinant plasmid pET-N by PCR and restricted enzyme digestionarker ; 1: pET-N digested with BamHⅠand SalⅠ2: pET-N identified by PCR; M2: DMarker DL2000 分析質(zhì)粒 pET32a-N 轉(zhuǎn)化 Rosetta（DE3）感受態(tài)，挑菌搖菌后對菌液在畢后對菌液超聲破碎并純化，純化后對其進(jìn)行 SDS-PAGE 分析的條帶（圖 2.3）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]馬動脈炎病毒分子生物學(xué)研究進(jìn)展[J]. 韋祖樟,袁世山.  病毒學(xué)報. 2008(05)
[2]馬動脈炎病毒GL蛋白主要抗原域的表達(dá)及間接ELISA的初步建立[J]. 梁成珠,曹瑞兵,魏建超,朱來華,陳溥言,高宏偉.  微生物學(xué)報. 2006(03)
[3]ICTV第八次報告的最新病毒分類系統(tǒng)[J]. 洪健,周雪平.  Virologica Sinica. 2006(01)
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[6]馬的病毒性動脈炎[J]. 黃正才.  四川畜牧獸醫(yī). 1997(04)

碩士論文
[1]馬流感病毒抗原捕捉ELISA檢測方法的建立及其初步應(yīng)用[D]. 姬媛媛.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2011



本文編號：3093761