發(fā)布時(shí)間：2021-03-22 01:53

　　馬病毒性動(dòng)脈炎（Equine viral arteritis,EVA）是由馬動(dòng)脈炎病毒（Equine arteritis virus,EAV）引起的，在馬屬動(dòng)物中通過(guò)生殖道和呼吸道途徑傳播的一種傳染病。本研究以引進(jìn)參考毒株Bucyrus株為基礎(chǔ)毒株，通過(guò)病毒培養(yǎng)，提取RNA并通過(guò)RT-PCR獲得了N基因，用原核表達(dá)載體pET32a構(gòu)建重組質(zhì)粒pET32a-N并轉(zhuǎn)化Rosetta（DE3）。通過(guò)對(duì)表達(dá)條件的不斷優(yōu)化，N蛋白最終以90%上清形式表達(dá)，并用鎳柱進(jìn)行純化。經(jīng)Western blot鑒定N蛋白免疫原性良好，可作為免疫原用于單抗的制備。將純化的N蛋白作為免疫原，免疫4-6周齡雌性BALB/c小鼠，通過(guò)細(xì)胞融合技術(shù)制備了5株單抗，分別命名為1C11、2B1、2B3、3F11、8C4。經(jīng)3次克隆化培養(yǎng)后，Western blot、間接免疫熒光和間接ELISA鑒定該5株單抗均針對(duì)N蛋白，而不與His標(biāo)簽反應(yīng)。經(jīng)競(jìng)爭(zhēng)活性檢測(cè)，單抗2B3、8C4具有良好的競(jìng)爭(zhēng)活性，可用于競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法的建立。將2株競(jìng)爭(zhēng)活性的單抗擴(kuò)大培養(yǎng)，制備腹水，通過(guò)效價(jià)和親和力對(duì)腹水進(jìn)行評(píng)價(jià)，最終選用單抗8C4用于診... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：69 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

N基因的擴(kuò)增Fig.2.1AmplificationofNgene

圖 2.2 重組質(zhì)粒 pET-N 的 PCR 和酶切鑒定.2 Identification of the recombinant plasmid pET-N by PCR and restricted e000 DNA Marker ; 1: pET-N digested with BamHⅠand SalⅠ2: pET-N ideMarker DL2000SDS-PAGE 分析陽(yáng)性的重組質(zhì)粒 pET32a-N 轉(zhuǎn)化 Rosetta（DE3）感受態(tài)，挑菌導(dǎo)，誘導(dǎo)完畢后對(duì)菌液超聲破碎并純化，純化后對(duì)其進(jìn)行到清晰地目的條帶（圖 2.3）。

圖 2.2 重組質(zhì)粒 pET-N 的 PCR 和酶切鑒定on of the recombinant plasmid pET-N by PCR and restricted enzyme digestionarker ; 1: pET-N digested with BamHⅠand SalⅠ2: pET-N identified by PCR; M2: DMarker DL2000 分析質(zhì)粒 pET32a-N 轉(zhuǎn)化 Rosetta（DE3）感受態(tài)，挑菌搖菌后對(duì)菌液在畢后對(duì)菌液超聲破碎并純化，純化后對(duì)其進(jìn)行 SDS-PAGE 分析的條帶（圖 2.3）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]馬動(dòng)脈炎病毒分子生物學(xué)研究進(jìn)展[J]. 韋祖樟,袁世山.  病毒學(xué)報(bào). 2008(05)
[2]馬動(dòng)脈炎病毒GL蛋白主要抗原域的表達(dá)及間接ELISA的初步建立[J]. 梁成珠,曹瑞兵,魏建超,朱來(lái)華,陳溥言,高宏偉.  微生物學(xué)報(bào). 2006(03)
[3]ICTV第八次報(bào)告的最新病毒分類系統(tǒng)[J]. 洪健,周雪平.  Virologica Sinica. 2006(01)
[4]馬病毒性動(dòng)脈炎的研究現(xiàn)狀[J]. 楊松,劉永華,彭永剛,王佳麗.  中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2005(06)
[5]實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)馬動(dòng)脈炎病毒[J]. 梁成珠,楊松,高宏偉,朱來(lái)華,蔡梅紅,王謙濱,陳溥言.  中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2005(02)
[6]馬的病毒性動(dòng)脈炎[J]. 黃正才.  四川畜牧獸醫(yī). 1997(04)

碩士論文
[1]馬流感病毒抗原捕捉ELISA檢測(cè)方法的建立及其初步應(yīng)用[D]. 姬媛媛.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2011



本文編號(hào)：3093761