發(fā)布時(shí)間：2021-03-21 16:47

　　H5N1亞型高致病性禽流感病毒（Avian influenza virus,AIV）可導(dǎo)致禽類較高的發(fā)病率和死亡率,給世界養(yǎng)禽業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。該病在全球多地呈地方流行性,還可出現(xiàn)感染人的現(xiàn)象,因此給人類生命健康帶來巨大的威脅。目前,H5N1亞型AIV的HA蛋白頭部糖基化位點(diǎn)變化日益增大,糖基化組合模式日益復(fù)雜化,這使H5N1亞型的AIV的流行趨勢(shì)變得更加多樣化,同時(shí)也增加了疫苗的防控難度。本實(shí)驗(yàn)室前期研究表明,HA蛋白頭部158或169位糖基化位點(diǎn)缺失后可使H5N1亞型AIV對(duì)哺乳動(dòng)物的易感性和致病性顯著增強(qiáng)�！凹�(xì)胞因子風(fēng)暴”的爆發(fā)是H5N1亞型AIV產(chǎn)生高致病性的主要原因。樹突狀細(xì)胞（DCs）除了作為專職的抗原遞呈細(xì)胞,近年來該細(xì)胞在調(diào)控宿主天然免疫應(yīng)答方面也具有主導(dǎo)作用,在AIV誘導(dǎo)的“細(xì)胞因子風(fēng)暴”中可能發(fā)揮重要作用但具體作用機(jī)制尚不明確。本研究首先在體外成功誘導(dǎo)培養(yǎng)了小鼠骨髓源DCs,其次評(píng)估了 HA蛋白不同糖基化修飾的H5N1亞型AIV（rS-WT、rS△158和rS△169）對(duì)DCs天然免疫水平的影響,最后進(jìn)一步闡明分析糖基化位點(diǎn)的改變對(duì)DCs表面C型凝集素受體識(shí)別... 

【文章來源】：揚(yáng)州大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：86 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１?ＤＣｓ形態(tài)學(xué)特點(diǎn)??Ｆｉｇｕｒｅ?１－１?Ｔｈｅ?ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ?ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ?ｏｆ?ＤＣｓ??

一，也代表ＤＣｓ發(fā)揮抗原遞呈功能的重要標(biāo)志之一。應(yīng)用ＣＤ８０的流式抗體對(duì)培養(yǎng)的ＤＣｓ??進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，無論是否加ＬＰＳ刺激細(xì)胞均能表達(dá)ＣＤ８０分子（圖１－??３Ａ和Ｂ），加入ＬＰＳ刺激ＤＣｓ２４ｈ后，與未刺激組相比，表面標(biāo)志ＣＤ８０的表達(dá)量顯著??增加（圖?１－３Ｃ，?；？＜?０．０／）。??以上形態(tài)學(xué)，純度和功能的鑒定結(jié)果共同表明，誘導(dǎo)培養(yǎng)的ＤＣｓ具有典型的形態(tài)學(xué)特??征，純度符合要求，功能完整，ＤＣｓ培養(yǎng)成功可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。??

激光共聚焦觀察發(fā)現(xiàn)，ＣＤｌｌｃ在ＤＣｓ細(xì)胞膜上高表達(dá)，且培養(yǎng)的細(xì)胞具有典型的樹突??結(jié)構(gòu)（藍(lán)色箭頭所示）。應(yīng)用ＣＤｌｌｃ的流式抗體對(duì)ＤＣｓ進(jìn)行熒光標(biāo)記，流式細(xì)胞檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，??所誘導(dǎo)培養(yǎng)的ＤＣｓ純度高達(dá)９０．９％?（圖１－２?Ｂ），上述結(jié)果表明，培養(yǎng)的ＤＣｓ純度符合要??求并具有ＤＣｓ的典型特征。??ａＭＩＭｉ?Ｒ?，００１?二??＿?丨：：ｒ＼??１０°?１０?１０２?１０３?１〇４???＾?ＣＤ１１Ｃ＋??圖１－２?ＤＣｓ純度鑒定結(jié)果??Ｆｉｇｕｒｅ?１－２?Ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ＣＤｌｌｃ?ｏｎ?ｔｈｅ?ｃｕｌｔｕｒｅｄ?ＤＣｓ??Ａ：激光共聚焦觀察ＤＣｓ標(biāo)志ＣＤｌｌｃ的表迗情況；標(biāo)尺：２０ｐｍ；?Ｂ：流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)ＣＤｌｌｃ的表迗情??況。試驗(yàn)圖片來自于三次獨(dú)立試驗(yàn)之－－。??Ａ?Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ＣＤｌｌｃ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｎ?ｃｕｌｔｕｒｅｄ?ＤＣｓ?ｂｙ?ＣＬＳＭ；?Ｂａｒ＝２０?（ｉｍ．?Ｂ?Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ＣＤｌｌｃ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ??ｏｎ?ｃｕｌｔｕｒｅｄ?ＤＣｓ?ｂｙ?ＦＡＣＳ．?Ｉｍａｇｅｓ?ａｒｅ?ｆｒｏｍ?ｏｎｅ?ｏｆ?３?ｓｅｐａｒａｔｅ?ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ．??２．３樹突狀細(xì)胞的功能鑒定??ＤＣｓ的表面標(biāo)志ＣＤ８０為協(xié)同共刺激分子，是ＤＣｓ由未成熟轉(zhuǎn)變?yōu)槌墒斓牡臉?biāo)志之??一，也代表ＤＣｓ發(fā)揮抗原遞呈功能的重要標(biāo)志之一。應(yīng)用ＣＤ８０的流式抗體對(duì)培養(yǎng)的ＤＣｓ??進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，無論是否加ＬＰＳ刺激細(xì)胞均能表達(dá)ＣＤ８０分子（圖１－??３Ａ和Ｂ）

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]樹突狀細(xì)胞的研究進(jìn)展[J]. 張融瑋,趙振林.  臨床醫(yī)藥實(shí)踐. 2014(10)
[2]樹突狀細(xì)胞的研究進(jìn)展[J]. 馮鐘煦,劉劍勇.  醫(yī)學(xué)綜述. 2012(20)
[3]樹突狀細(xì)胞表面標(biāo)志及功能研究進(jìn)展[J]. 劉秀紅,付萍.  皮膚病與性病. 2009(03)
[4]樹突狀細(xì)胞及其應(yīng)用研究進(jìn)展[J]. 王勇.  大理學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)). 2005(03)

博士論文
[1]禽流感滅活病毒誘導(dǎo)鼻腔免疫應(yīng)答機(jī)制的研究[D]. 秦濤.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[2]HA蛋白糖基化修飾對(duì)H5N1亞型禽流感病毒復(fù)制、致病性和抗原性的影響[D]. 張曉劍.揚(yáng)州大學(xué) 2014



本文編號(hào)：3093210