抗菌肽因具有廣譜殺菌、抗腫瘤、抗病毒和抗原蟲等特點而成為新型抗生素類藥物的研究熱點。為了加快抗菌肽的生產(chǎn)速度,提高抗菌肽的產(chǎn)量,本研究在克隆獲得中國林蛙皮膚抗菌肽基因Temporin-1CEa的基礎(chǔ)上,構(gòu)建山羊乳腺特異性表達(dá)載體pBC1-neo-Temporin-1CEa,將其線性片段導(dǎo)入山羊成纖維細(xì)胞中,通過G418篩選獲得轉(zhuǎn)抗菌肽基因的山羊成纖維細(xì)胞系；利用克隆獲得的雞輸卵管上皮特異表達(dá)調(diào)控序列50V和Temporin-1CEa基因,構(gòu)建雞輸卵管特異性表達(dá)抗菌肽的雙順反子逆轉(zhuǎn)錄病毒載體pMX-GFP-5OV-TemporinlCEa;為了建立雞輸卵管基因表達(dá)調(diào)控的體外模型,在建立雞輸卵管封閉內(nèi)部消化法（Obturated Interior Digesting,OID法）的基礎(chǔ)上建立了雞輸卵管上皮細(xì)胞系；采用脂質(zhì)體法將pMX-GFP-5OV-Temporinl CEa載體轉(zhuǎn)染至雞輸卵管上皮細(xì)胞中,檢測其在細(xì)胞中的表達(dá)情況。本研究的主要結(jié)果如下：1.山羊乳腺特異性表達(dá)載體的構(gòu)建根據(jù)GenBank中的參照序列克隆Temporin-1CEa基因并將其連入pBC1-neo載體中,PCR鑒定、... 

【文章來源】：東北林業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：98 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

抗菌肽誘導(dǎo)殺菌作用模型

2.1.2實驗載體pEASY-T3 購于 transgene 公司（圖 2-1);pBCl-neo載體由吉林大學(xué)農(nóng)學(xué)部畜牧獸醫(yī)學(xué)院動物胚胎工程實驗室惠贈（圖2-2)。

pEASY-T3 購于 transgene 公司（圖 2-1);pBCl-neo載體由吉林大學(xué)農(nóng)學(xué)部畜牧獸醫(yī)學(xué)院動物胚胎工程實驗室惠贈（圖2-2)。V -T3 1 a y圖2-1克隆載體pEASY-T3 圖2-2真核表達(dá)載體pBCl-neoFigiire2-1 The cloning vector of pEASY-T3 Figure2-2 The eukaryoUc expression vector of pBCl neo2.1.3試劑與設(shè)備表2-1主要試劑及來源Table 2- ！ Major reagents and sources 試劑 公司 Trizol 丨 nvitrogenDNA 測序 Invitrogen引物合成 丨nvitrogenRNase inhibitor TaKaRaRTase M-MLV TaKaRa-19-

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]人乳鐵蛋白cDNA基因乳腺表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定[J]. 孟立,張艷麗,許欣,王子玉,閆益波,龐訓(xùn)勝,鐘部帥,黃榮,宋洋,王金玉,王鋒.  生物工程學(xué)報. 2011(02)
[2]中國林蛙皮膚抗菌肽基因的cDNA克隆及抗菌、抗癌和溶血活性的測定[J]. 虞鳳慧,張麗芳,李俊峰,李曉帆,付欣,尚德靜.  生物工程學(xué)報. 2009(01)
[3]慢病毒載體介導(dǎo)的增強型綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因小鼠的建立[J]. 劉勤,張晉宇,王露露,劉昌峨,王勇,萬瑛.  第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報. 2008(10)
[4]雞卵清蛋白基因第一內(nèi)含子和3′-調(diào)控區(qū)對外源基因表達(dá)的調(diào)控作用[J]. 房浩霞,王安平,高波,孫懷昌.  生物工程學(xué)報. 2008(02)
[5]發(fā)情期家兔輸卵管上皮細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞的分離培養(yǎng)與鑒定[J]. 趙永貞,陳秀荔,張彥明,曹斌云,馬云,王利心.  西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2008(02)
[6]雞輸卵管特異表達(dá)載體的優(yōu)化及體內(nèi)表達(dá)[J]. 高波,孫懷昌,王永娟,房浩霞,宋成義.  生物工程學(xué)報. 2008(01)
[7]小鼠腎小管上皮細(xì)胞的原代培養(yǎng)及鑒定[J]. 吳國娟,楊明,王典仁,王彥英,沈紅,張中文.  解剖學(xué)報. 2007(06)
[8]Transfection and expression of exogenous gene in laying hens oviduct in vitro and in vivo[J]. 高波,孫懷昌,宋成義,王志躍,陳芹,宋紅芹.  Journal of Zhejiang University Science. 2005(02)
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[10]生長曲線擬合及細(xì)胞群體倍增時間的簡化計算[J]. 嚴(yán)泉劍,李六金,張宇梅,楊貴忠,劉海軍,郭金龍,王禾,邵國興.  第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報. 2002(10)

博士論文
[1]轉(zhuǎn)基因山羊乳腺上皮細(xì)胞系建立與轉(zhuǎn)基因克隆胚發(fā)育[D]. 鄭月茂.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2005
[2]表達(dá)人組織激肽釋放酶雞輸卵管暫態(tài)生物反應(yīng)器的研究[D]. 高波.揚州大學(xué) 2005

碩士論文
[1]轉(zhuǎn)RNA干涉Myostatin基因小鼠成纖維細(xì)胞的篩選[D]. 薛超.東北林業(yè)大學(xué) 2011
[2]不同乳蛋白調(diào)控區(qū)指導(dǎo)hLF基因在轉(zhuǎn)基因小鼠中表達(dá)水平的研究[D]. 繆明星.揚州大學(xué) 2009
[3]逆轉(zhuǎn)錄病毒為載體制備轉(zhuǎn)基因雞的初步研究[D]. 張秋婷.東北林業(yè)大學(xué) 2009
[4]轉(zhuǎn)蜘蛛拖絲蛋白基因四聚體綿羊成纖維細(xì)胞株的篩選[D]. 原璐.東北林業(yè)大學(xué) 2009



本文編號：3091734