為建立一種快速、準確地檢測H1和H3亞型豬流感病毒（swine influence virus,SIV）的方法,根據(jù)H1和H3亞型SIV血凝素（hemagglutinin,HA）基因保守序列,分別設計2對特異性引物和2條Taq Man探針,建立雙重實時熒光定量RT-PCR方法。結(jié)果顯示,該方法敏感性高,可檢測到最低拷貝數(shù)為102拷貝/μL;重復性良好,重復孔Ct值的變異系數(shù)均在5%以下;特異性好,除H1和H3亞型SIV外,H4、H5、H7、H9亞型SIV、豬瘟病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒、口蹄疫病毒、偽狂犬病病毒檢測均為陰性;在田間樣品中成功檢出1株H1和1株H3亞型SIV,檢出率為1.16%。該方法準確、快速、靈敏、特異,可為H1、H3亞型SIV的快速鑒別檢測及流行病學調(diào)查提供有效的技術手段。 

【文章來源】：中國畜牧獸醫(yī). 2017,44(10)北大核心

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 毒株
        1.1.2 主要試劑和儀器
    1.2 方法
        1.2.1 引物及探針的設計與合成
        1.2.2 RNA或DNA提取
        1.2.3 標準陽性質(zhì)粒的制備與鑒定
        1.2.4 反應體系與程序的優(yōu)化
        1.2.5 標準曲線的繪制
        1.2.6 敏感性試驗
        1.2.7 特異性試驗
        1.2.8 重復性試驗
        1.2.9 田間樣品的檢測
2 結(jié)果
    2.1 雙重實時熒光定量RT-PCR反應條件優(yōu)化
    2.2 標準曲線的建立
    2.3 敏感性試驗結(jié)果
    2.4 特異性試驗結(jié)果
    2.5 重復性試驗結(jié)果
    2.6 田間樣品的檢測
3 討論
4 結(jié)論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]H1亞型豬流感病毒一步法實時熒光定量RT-PCR檢測方法的建立及應用[J]. 劉好朋,胡京京,唐續(xù),裴仉福,李冰,李琳,陳瑞愛,賀東生.  中國畜牧獸醫(yī). 2014(11)
[2]豬圓環(huán)病毒2型TaqMan熒光定量PCR檢測方法的建立[J]. 郭慧娟,李秀麗,張國偉,鄢明華,李�；�,李富強.  中國畜牧獸醫(yī). 2014(05)
[3]豬流感病毒概述[J]. 楊帥,朱聞斐,舒躍龍.  病毒學報. 2013(03)
[4]豬流感病毒實時熒光定量RT-PCR檢測方法的建立[J]. 張?zhí)?凌宗帥,岳志芹,徐彪,梁成珠,劉文鵬,張煥海,張藝兵.  中國畜牧獸醫(yī). 2012(06)
[5]豬流感病毒SYBR GreenⅠ定量RT-PCR檢測方法的建立及應用[J]. 張鵬超,師小瀟,哈卓,劉永杰,劉惠莉.  中國預防獸醫(yī)學報. 2010(10)
[6]A型豬流感病毒實時熒光定量PCR檢測方法的建立及應用[J]. 歐陽振宇,唐連飛,朱中武,肖家勇,孟芳,黃萍,吳愈柏.  中國畜牧獸醫(yī). 2010(09)
[7]同時檢測新甲型H1N1及人季節(jié)性H1N1和H3N2流感病毒的單管多重熒光定量PCR方法[J]. 秦萌,王大燕,黃芳,聶凱,曲梅,王淼,韓峰,趙翔,成艷輝,舒躍龍,馬學軍.  病毒學報. 2010(02)
[8]豬流感診斷技術研究進展[J]. 畢保良,李進濤.  中國畜牧獸醫(yī). 2009(10)
[9]H3亞型豬流感病毒熒光定量PCR檢測方法的建立[J]. 王云龍,陳小科,韓潔,李玉林,李恒思,王真,鄧黎黎.  動物醫(yī)學進展. 2009(06)
[10]豬流感研究進展[J]. 張明明,王強,王小輝.  安徽農(nóng)業(yè)科學. 2009(16)

碩士論文
[1]五重熒光定量RT-PCR檢測甲型流感病毒方法的建立和應用及2010～2013年杭州地區(qū)人H3N2病毒流行病學分析[D]. 戴玉柱.浙江大學 2015



本文編號：3091271