蛋雞脂肪肝出血綜合征（FLHS）是主要營(yíng)養(yǎng)代謝病之一。研究表明胰島素水平與營(yíng)養(yǎng)代謝病的發(fā)生發(fā)展有密切的關(guān)系。但關(guān)于胰島素信號(hào)通路紊亂與FLHS發(fā)病機(jī)制的研究甚少。因此,基于本課題組在前研究發(fā)現(xiàn)FLHS的蛋雞出現(xiàn)高胰島素、高葡萄糖血癥,且胰島素信號(hào)通路顯著改變的結(jié)果,將進(jìn)一步探索胰島素信號(hào)通路紊亂與蛋雞肝細(xì)胞脂質(zhì)代謝的關(guān)系。本研究通過(guò)蛋雞肝臟原代細(xì)胞體外實(shí)驗(yàn),利用二步原位灌流法獲得高產(chǎn)蛋雞原代肝細(xì)胞,然后用高濃度葡萄糖處理細(xì)胞建立胰島素抵抗模型（IR）,探討IR對(duì)蛋雞肝細(xì)胞脂質(zhì)代謝的影響;用mTOR抑制劑rapamycin處理細(xì)胞48h,探究rapamycin對(duì)蛋雞肝細(xì)胞mTOR的抑制作用和細(xì)胞脂質(zhì)合成的影響;rapamycin處理細(xì)胞后添加葡萄糖培養(yǎng)細(xì)胞,分析mTOR是否通過(guò)負(fù)反饋調(diào)節(jié)IR促進(jìn)蛋雞肝細(xì)胞脂質(zhì)合成。結(jié)果如下:（1）與對(duì)照組相比,葡萄糖（11、33、44mmol/L）處理細(xì)胞12h能夠增強(qiáng)細(xì)胞對(duì)葡萄糖的消耗能力（P<0.01）,而處理細(xì)胞24h和36h則顯著降低消耗葡萄糖的能力（P<0.05）表明IR模型建立成功;其中55mmol/L葡萄糖處理細(xì)胞12h沒(méi)有顯著... 

【文章來(lái)源】：江西農(nóng)業(yè)大學(xué)江西省

【文章頁(yè)數(shù)】：60 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

胰島素及論信分通路（DoupontJ.etal.2009）

圖 2-1 高嚴(yán)蛋雞原學(xué)肝細(xì)胞論與時(shí)間的形態(tài)學(xué)觀察100X (0h)；200X（3h，24h 除 8 d）Fig 2-1 Morphological observation for primary hepatocytes of laying hens with peak eggproduction at different time.100X (0h)；200X（3h，24h and 8 d）（2）高嚴(yán)蛋雞原學(xué)肝細(xì)胞 ALB 的分泌除糖原鑒使如圖 2-2 所作，本實(shí)驗(yàn)可用灌流法分離與的原學(xué)肝細(xì)胞在接板年第 1 天就開(kāi)始分泌 ALB，并分泌量持續(xù)增長(zhǎng)，在第 3 天達(dá)到最高。第 4 天分泌量開(kāi)始減少，但從第天開(kāi)始，ALB 分泌量又開(kāi)始增長(zhǎng)，與直到第 9 天。培養(yǎng)細(xì)胞 48h 時(shí)進(jìn)嚴(yán)糖原染色，細(xì)胞學(xué)多糖如染通除紫紅色，結(jié)通所陽(yáng)性。

2.2 IR 對(duì)胰島素信分通路相本基因 mRNA 除蛋白他達(dá)的影響如圖 2-4 所作，IR 組 mTOR，S6K1 除 4EBP 基因 mRNA 水平他達(dá)與正常組相比顯著升高（P<0.05），但 InsR mRNA 他達(dá)水平?jīng)]如升高，與正常組差異論顯著（P>0.05Western blot 結(jié)通他明 IR 組細(xì)胞學(xué) S6K1 的磷酸化蛋白他達(dá)增高（圖 2-5）。

【參考文獻(xiàn)】：
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