雞球蟲病是由頂復(fù)門寄生蟲——艾美耳球蟲引起的世界范圍內(nèi)嚴(yán)重危害養(yǎng)禽業(yè)發(fā)展的寄生蟲病，給養(yǎng)禽業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前，養(yǎng)禽業(yè)采用抗球蟲藥、強(qiáng)毒活疫苗、減毒活疫苗來防控雞球蟲病。但他們自身存在的一些缺點使得未能有效防控雞球蟲病，因而研發(fā)高效的新型疫苗已成為緩解養(yǎng)禽業(yè)虧損的當(dāng)務(wù)之急�；蚬こ讨亟M蛋白疫苗為新型疫苗的研發(fā)提供了重要方向，而篩選出雞球蟲生活史中的特異性抗原對抗球蟲重組蛋白疫苗的研制的至關(guān)重要。柔嫩艾美爾球蟲微線蛋白2（EtMIC2）可以作為新型疫苗的候選抗原來阻斷子孢子侵入宿主細(xì)胞。為了獲得充足的抗原，必須實現(xiàn)EtMIC2蛋白的高效大量表達(dá)。而在酵母真核表達(dá)系統(tǒng)中，巴斯德畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)不僅具有基因操作簡單、發(fā)酵生長速度快、外源蛋白表達(dá)量高、發(fā)酵成本低廉等優(yōu)點，還具有高等真核表達(dá)系統(tǒng)的蛋白翻譯后的各種修飾作用，如蛋白磷酸化和糖基化修飾功能等。該系統(tǒng)所表達(dá)產(chǎn)物的免疫學(xué)活性和生物學(xué)功能與天然蛋白質(zhì)較為接近。因此，在本研究中，我們從SD-01株柔嫩艾美耳球蟲的第二代裂殖子總RNA中擴(kuò)增并克隆了EtMIC2基因，進(jìn)一步構(gòu)建真核表達(dá)載體pPIC9-EtMIC2和原核表達(dá)載體PET30a-... 

【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

柔嫩艾美耳球蟲7d生活史Fig.1-17dayslifecycleofEimeriatenella孢子生殖：球蟲卵囊隨雞的糞便排到外界環(huán)境中，此時的卵囊稱為未孢子化卵囊，

壞死細(xì)胞、組織被微生物分解產(chǎn)生的有毒物質(zhì)還有可能導(dǎo)致雞體皮的破壞更容易導(dǎo)致繼發(fā)性感染�，F(xiàn)將各種球蟲的臨床癥狀及病艾美耳球蟲病：3~6 周齡雛雞發(fā)病率最高，感染后有 4 天的潛在期精神萎頓，羽毛逆立，縮頭閉眼，嗉囊脹滿，喜飲水無食欲，喜第 5 天，肛門周圍羽毛被血液污染，繼而由于自體中毒而出現(xiàn)共痹、痙攣等神經(jīng)癥狀。出現(xiàn)排泄血便甚至鮮血，貧血明顯，血便死亡，嚴(yán)重時死亡率高達(dá) 80%。多數(shù)雞第 7 天停止出血，第 8 天 8 天后尚存活的雛雞，如果管理良好即專項康復(fù)。病理變化局限，個別情況下出血部位超過回-盲連接處擴(kuò)展到其它部位的消化拇指，內(nèi)部充滿混有血液的組織塊等內(nèi)容物，嚴(yán)重者盲腸組織壞芯（圖 1-2）。

感染后 4~5 天排泄大量帶粘液的血便，有時引起條內(nèi)存活的雞，體質(zhì)衰弱，不能迅速康復(fù)，多數(shù)因繼發(fā)感染細(xì)菌或于柔嫩艾美爾球蟲球蟲。病理變化為小腸長度縮短到約為正常長正常的 2 倍。最顯著的炎癥反應(yīng)見于小腸中段，盡管該種配子生至多有中度炎癥反應(yīng)，小腸粘膜出現(xiàn)出血點和灰白色針尖大小到腸內(nèi)容物呈暗紅色或猩紅色而且含血凝塊或纖維蛋白，嚴(yán)重感染呈現(xiàn)干酪樣侵蝕，在糞便中出現(xiàn)凝固的血液和粘膜碎塊（圖 1-3


本文編號：3079537