本試驗用液氦取代傳統(tǒng)的液氮作為冷源冷凍牛GV期卵母細(xì)胞，通過研究液氦對牛GV期卵母細(xì)胞發(fā)育能力的影響、不同冷源冷凍牛GV期卵母細(xì)胞對GDF9、BAX、ZAR1基因mRNA表達(dá)量的影響，分析液氦冷凍牛GV期卵母細(xì)胞的可行性，以及牛卵母細(xì)胞經(jīng)液氦冷凍解凍后成熟、發(fā)育能力與所選基因表達(dá)量變化之間的關(guān)系。試驗一：將牛GV期卵母細(xì)胞隨機分為三組：（1）新鮮對照組；（2）液氮玻璃化冷凍組；（3）液氦玻璃化冷凍組。其中，兩個試驗組都選用20%乙二醇（EG）、20%二甲基亞砜（DMSO）和0.5M（moL/L）蔗糖作為冷凍液。卵母細(xì)胞經(jīng)冷凍解凍后進(jìn)行體外成熟（IVM）、體外受精（IVF）和體外培養(yǎng)（IVC），并統(tǒng)計數(shù)據(jù)。對照組可直接進(jìn)行IVM、IVF、IVC。結(jié)果顯示：牛GV期卵母細(xì)胞經(jīng)液氮和液氦OPS玻璃化冷凍，卵母細(xì)胞解凍之后形態(tài)正常率為81.1%vs.89.0%，差異顯著（P<0.05）；成熟24h后，統(tǒng)計極體排放情況用以確定細(xì)胞成熟率，對照組、液氮OPS玻璃化冷凍組和液氦OPS玻璃化冷凍組的成熟率分別為69.5%、42.6%、50.6%，對照組顯著高于兩個冷凍組（P<0.05），但... 

【文章來源】：河南科技大學(xué)河南省

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第1章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 哺乳動物卵母細(xì)胞冷凍研究進(jìn)展
    1.2 卵母細(xì)胞的成熟
        1.2.1 細(xì)胞器重組
        1.2.2 成熟過程中細(xì)胞骨架纖維的動態(tài)
        1.2.3 分子成熟
        1.2.4 細(xì)胞質(zhì)成熟的標(biāo)志物和抗氧化系統(tǒng)
    1.3 玻璃化冷凍
        1.3.1 玻璃化冷凍原理
        1.3.2 冷凍保護(hù)劑
    1.4 冷源
        1.4.1 冷源發(fā)展史
        1.4.2 液氦
    1.5 冷凍對卵母細(xì)胞的影響
    1.6 GV 期卵母細(xì)胞冷凍的研究
    1.7 母源基因
        1.7.1 GDF9 基因
        1.7.2 ZAR1 基因
        1.7.3 BAX 基因
    1.8 本研究的目的及意義
第2章 液氦玻璃化冷凍對牛 GV 期卵母細(xì)胞發(fā)育能力的影響
    2.1 試驗材料
        2.1.1 材料來源
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器設(shè)備
        2.1.4 主要溶液配置
    2.2 試驗方法
        2.2.1 卵母細(xì)胞采集
        2.2.2 卵泡液的制備
        2.2.3 卵母細(xì)胞體外成熟
        2.2.4 牛卵母細(xì)胞成熟評定方法
        2.2.5 卵母細(xì)胞體外受精和體外培養(yǎng)
        2.2.6 OPS 制備
        2.2.7 牛 GV 期卵母細(xì)胞液氮玻璃化冷凍與解凍
        2.2.8 牛 GV 期卵母細(xì)胞液氦玻璃化冷凍與解凍
        2.2.9 試驗設(shè)計
        2.2.10 統(tǒng)計分析
    2.3 試驗結(jié)果
    2.4 討論
第3章 不同冷源冷凍牛 GV 期卵母細(xì)胞對 GDF9、ZAR1、BAX 基因 mRNA 表達(dá)量的影響
    3.1 試驗材料
        3.1.1 材料來源
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要儀器設(shè)備
        3.1.4 主要溶液配置
    3.2 試驗方法
        3.2.1 卵母細(xì)胞的采集
        3.2.2 OPS 制備
        3.2.3 牛 GV 期卵母細(xì)胞液氮玻璃化冷凍與解凍
        3.2.4 牛 GV 期卵母細(xì)胞液氦玻璃化冷凍與解凍
        3.2.5 卵母細(xì)胞的體外成熟
        3.2.6 牛卵母細(xì)胞成熟評定方法
        3.2.7 牛卵母細(xì)胞總 RNA 提取和逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)
        3.2.8 引物設(shè)計與 qRT-PCR 分析
        3.2.9 試驗設(shè)計
    3.3 試驗結(jié)果
        3.3.1 普通 PCR 檢測產(chǎn)物檢測結(jié)果
        3.3.2 QTR-PCR 檢測結(jié)果
    3.4 討論
第4章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
縮略語詞匯表
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間的研究成果


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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[2]DNA甲基化和組蛋白修飾調(diào)節(jié)牛ZAR1基因表達(dá)的研究[D]. 辛鵬慧.內(nèi)蒙古大學(xué) 2009
[3]豬生發(fā)泡期卵母細(xì)胞的玻璃化冷凍保存[D]. 戴志俊.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008
[4]蒙古綿羊Bcl-2/Bax基因cDNA的克隆及序列分析[D]. 郭宏儒.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008



本文編號：3078886