反芻動物氨基酸營養(yǎng)需要一直是研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。由于反芻動物采食的氨基酸有一部分會被瘤胃微生物降解，并且其代謝和生產(chǎn)的氨基酸需要量受生理狀態(tài)和生產(chǎn)水平的影響，因此研究人員很難準(zhǔn)確測定氨基酸的需要量。而氨基酸在反芻動物生產(chǎn)性能發(fā)揮中所起的重要作用又使得搞清氨基酸需要是一個迫切的問題。氨基酸營養(yǎng)需要測定的困難表現(xiàn)在理論和技術(shù)兩個方面。其中理論上最重要的問題是關(guān)于氨基酸的吸收調(diào)控機(jī)制還沒有完全搞清楚。T1R基因家族的T1R1基因和T1R3基因?qū)Π被岬淖R別發(fā)揮著重要的作用，其配體是氨基酸。越來越多的實(shí)驗(yàn)表明了T1R1基因和T1R3基因除了在味蕾中表達(dá)外，還在胃腸道中表達(dá)，并且是以異源二聚體的形式發(fā)揮作用的，參與氨基酸的吸收調(diào)控。為此，本文以實(shí)時熒光定量PCR的方法檢測了在魯西牛消化道各段中T1R1基因和T1R3基因的表達(dá)情況及其規(guī)律。動物體內(nèi)對氨基酸的吸收主要是以小肽的形式進(jìn)行吸收的，而小肽的吸收則需要依靠小肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白載體，即pepT1，所以本研究同時還檢測了pepT1基因在魯西牛消化道各段中的表達(dá)情況，以揭示這3個基因的表達(dá)是否有相關(guān)的聯(lián)系。通過實(shí)驗(yàn)我們得到了以下結(jié)果：1、魯西牛消化道各段中... 

【文章來源】：江蘇師范大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
摘要
Abstract
目錄
引言
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 氨基酸受體研究簡介
        1.1.1 充當(dāng)氨基酸受體的功能要素
        1.1.2 已經(jīng)鑒定出的氨基酸受體簡介
        1.1.3 消化道中表達(dá)的味覺受體的研究進(jìn)展
    1.2 小肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白載體 1 簡介
        1.2.1 pepT1 的分子結(jié)構(gòu)
        1.2.2 PepT1mRNA在動物組織中的表達(dá)
        1.2.3 PepT1 的轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制
    1.3 實(shí)時熒光定量PCR簡介
        1.3.1 實(shí)時熒光定量PCR的過程
        1.3.2 一步法與兩步法實(shí)時熒光定量PCR
        1.3.3 熒光染料的種類
        1.3.4 實(shí)時熒光定量PCR的類型
2 實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線、材料和方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)樣本的采集
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑劑
        2.2.3 實(shí)驗(yàn)所用溶液與培養(yǎng)基的配制
        2.2.4 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 提取各組織的總RNA
        2.3.2 所提取的總RNA的檢測
        2.3.3 反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)
        2.3.4 引物和TaqMan探針的設(shè)計(jì)
        2.3.5 普通梯度PCR
        2.3.6 實(shí)時熒光定量PCR條件的摸索
        2.3.7 質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品的制作
        2.3.8 實(shí)時熒光定量PCR
    2.4 實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析
        2.4.1 2-△△Ct 方法的數(shù)學(xué)推導(dǎo)
        2.4.2 內(nèi)標(biāo)及相關(guān)參照因子的選擇
3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 提取的總RNA
    3.2 所研究基因T1R1、T1R3、pepT1 和管家基因β-actin最佳退火溫度
    3.3 T1R1、T1R3、pepT1 和β-actin特異性目的片段的回收
    3.4 菌液PCR鑒定陽性重組子
    3.5 提取質(zhì)粒測序
    3.6 目的基因和管家基因擴(kuò)增效率的驗(yàn)證
    3.7 魯西牛消化道各段中T1R1、T1R3 及pepT1 mRNA的相對表達(dá)結(jié)果
        3.7.1 魯西牛消化道各段T1R1 基因mRNA的相對表達(dá)
        3.7.2 魯西牛消化道各段T1R3 基因mRNA的相對表達(dá)
        3.7.3 魯西牛消化道各段pepT1 基因mRNA的相對表達(dá)
        3.7.4 T1R1、T1R3、pepT1 基因mRNA在魯西牛消化道同一段的相對表達(dá)
    3.8 T1R1、T1R3、pepT1 基因與氨基酸吸收調(diào)控的相關(guān)性分析
4 討論
    4.1 相關(guān)實(shí)驗(yàn)方法的改進(jìn)探討
        4.1.1 牛消化組織總RNA的提取、檢測
        4.1.2 反轉(zhuǎn)錄引物的選擇
        4.1.3 小片段DNA的回收、純化
        4.1.4 重組子的轉(zhuǎn)化、鑒定
    4.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析與討論
5 結(jié)論與創(chuàng)新點(diǎn)
    5.1 結(jié)論
    5.2 創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
作者簡介
學(xué)位論文數(shù)據(jù)集


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]哺乳類動物胃腸道內(nèi)味覺受體的信號研究[J]. 陳曉慧,張春雷,陳宏,房興堂.  中國牛業(yè)科學(xué). 2012(05)
[2]實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)及實(shí)例分析[J]. 李潔.  中國現(xiàn)代教育裝備. 2009(01)

博士論文
[1]反芻動物瘤胃消化代謝的調(diào)控以及必需氨基酸在胃腸道的氧化[D]. 沈向真.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2003



本文編號：3077915