牛病毒性腹瀉（Bovine viral diarrhea, BVD）是由牛病毒性腹瀉病毒（Bovine viral diarrhea virus, BVDV）引起的給奶牛業(yè)造成嚴(yán)重?fù)p失的傳染性疾病。本研究的目的是確定北京地區(qū)牛場(chǎng)牛病毒性腹瀉的流行病學(xué)特點(diǎn)及篩查持續(xù)性感染牛。2010-2013年間,本研究調(diào)查了北京郊區(qū)的25個(gè)牛場(chǎng),采集和檢測(cè)樣品4,327份（4,320份血清樣品和7份組織樣品）,應(yīng)用間接ELISA方法對(duì)隨機(jī)選取的1,000份樣本進(jìn)行了抗體檢測(cè),應(yīng)用抗原捕獲ELISA和RT-PCR方法對(duì)全部樣本的病毒抗原進(jìn)行了檢測(cè),結(jié)果檢測(cè)出18份抗原陽性樣品,其中12份樣本確定來自于持續(xù)性感染牛。隨機(jī)選取的1,000份血清樣本抗體檢測(cè)結(jié)果表明有934份呈現(xiàn)陽性。應(yīng)用細(xì)胞培養(yǎng)法對(duì)18份陽性樣本進(jìn)行病毒分離,細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果顯示所有毒株的生物型都為非致細(xì)胞病變型（noncytopathic, NCP）型,隨后本研究對(duì)病毒的5’端非編碼區(qū)（untranslated region, UTR）和Npro進(jìn)行了PCR擴(kuò)增和克隆測(cè)序,參考國內(nèi)外報(bào)道毒株,依據(jù)5’-UTR構(gòu)建了系統(tǒng)進(jìn)化樹,結(jié)果顯示18株病... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１－１?ＢＶＤＶ在電鏡下的形態(tài)??Ｆｉｇｕｒｅ?１－１?Ｔｈｅ?ｅｌｅｃｔｒｏｎ?ｍｉｃｒｏｇｒａｐｈ?ｏｆ?ＢＶＤＶ?（Ａｎｎｅ?Ｗｅｇｅｈ?ｅｔ?ａｌ．，２０１１）??

２．４．３分離株序列測(cè)定??對(duì)實(shí)驗(yàn)室分離的１８株ＢＶＤＶ進(jìn)斤了?２３個(gè)基因片段（１８株病毒的５＇－ＵＴＲ與５株病毒的??ＮＰ？）的測(cè)序，對(duì)每份樣品經(jīng)ＲＮＡ提取、ＲＴ－ＰＣＲ后部分電泳結(jié)果見圖２－１與２－２。最后將測(cè)序??結(jié)果上傳到ＧｅｎＢａｎｋ數(shù)據(jù)庫，相應(yīng)的登錄號(hào)為１８株病毒５’－ＵＴ民：ＫＦ９２５５０３－?ＫＦ９２５５２０，５株??病毒?ＮＰｒｏ：?ＫＦＷ５５２Ｉ－ＫＦ９２５５２５。??２．４．４系統(tǒng)進(jìn)化樹分析??為研究ＢＶＤＶ在北京地區(qū)牛群中基因遺傳進(jìn)化規(guī)律，我們Ｌ：＞１?ＮＣＢ１?Ｇｅｎｂａｎｋ數(shù)據(jù)庫中巧株??ＢＶＤＶ－１型和２型病毒的５’－ＵＴＲ基因片段序列和２２株的ＮＰ？基因片段序列為參考，這些參考??病毒株分離自多個(gè)國家，包爸了?ｌａ到Ｉｑ基因型。結(jié)果顯示我們的分離毒株分別為：Ｉｍ?（６株）、??ｌａ?（５株）、Ｉｄ?（３株）、Ｉｑ?（３株）、化（Ｉ株）。我們的ＢＶＤＶ分離株基因系統(tǒng)進(jìn)化樹分析??結(jié)果見圖２－４。５’－ＵＴＲ進(jìn)化樹與ＮＰｍ進(jìn)化樹中毒株ＢＪ１２０１被歸為不同的亞型，其中在５’－ＵＴ艮??進(jìn)化樹中為Ｉｄ亞型，而在ＮＰｍ進(jìn)化樹中為Ｉｍ亞型。??２２??

化於２?（Ａ），化化３腳，７ＸＲ－４（Ｃ），化Ｗ－７?（巧，７１Ｒ－Ｓ〇Ｅ），胤７－＂巧及Ｍ化１５腳在健康牛及ＰＩ牛外周血單個(gè)核??細(xì)胞中的ｍＲＮＡ表達(dá)???３－１?Ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅ泌ｉｏｎ?ｏｆ?ｍＲＮＡ?化ｒ?ｇｅｎｅｓ?ｅｎｃｏｄｉｎｇ?（Ａ）?７１護(hù)２，（巧?１１肛３，（Ｃ）化Ｒ－４，?（Ｄ）化化７，（巧?７ＸＫ－Ｓ，（巧???ａｎｄ?（Ｇ）?Ｍ１４５?ｉｎ?陽ＭＣｓ?ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ?ｆｒｏｍ?ｈｅａｌｔｈｙ?ｃａｔｔｌｅ?ａｎｄ?ＰＩ?ｃａｔｔｌｅ?ｗａｓ?地ａｌｙｚｅｄ?ｂｙ?ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ?ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ?ＰＣＲ．??Ｄａｔａ?ａｒｅ?ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ?化化ｅ?ｍｅａｎ?±?化ｒ?ｅａｃｈ?ｓａｍｐｌｅ?（ｎ?＝?６）．?＊，?Ｐ?＜?０．０５；?＊＊，?Ｐ?＜?０．０１?；＊＊＊，?Ｐ?＜?０．００１．??ＩＲＦ－３與ＩＲＦ－７表達(dá)量變化??痘病毒感染過程中，ＩＲＦ－３和ＩＲＦ－７是調(diào)節(jié)Ｉ型干擾素表達(dá)的主要轉(zhuǎn)錄因子。其中ＩＲＦ－３??節(jié)ＩＦＮ－Ｐ，而ＩＲＦ－７主要調(diào)節(jié)ＩＦＮ－ａ的表達(dá)，當(dāng)然ＩＲＦ－３和ＩＲＦ－７也能形成異二聚體共同??ＦＮ－ｏ／ｐ的表達(dá)。本研巧中我們應(yīng)用Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ檢測(cè)了牛ＰＢＭＣｓ中ＩＲＦ－３和ＩＲＦ－７的表達(dá)??結(jié)果顯示來自于ＰＩ牛的巧ＭＣｓ中ＩＲＦ－３?（Ｐ?＝?０．００３）和ＩＲＦ－７?（戶＝０．０３２）都出現(xiàn)了顯??低。??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3074034