無漿體�。ˋnaplasmosis）,舊稱邊蟲病,是由各種無漿體（Anaplasma）經(jīng)蜱傳播而寄生于牛、羊、鹿等動物包括人的血細胞內(nèi),引起患病動物及人的一種慢性或急性傳染性血液寄生蟲病。該病主要引起動物的體重下降,產(chǎn)奶量下降,流產(chǎn)等,嚴重者可導(dǎo)致死亡,造成嚴重的經(jīng)濟損失。已知的無漿體病病原包括邊緣無漿體（A. marginale）、中央無漿體（A.centrale）、嗜吞噬細胞無漿體（A. phagocytophilum）、綿羊無漿體（A.ovis）、牛無漿體（A. bovis）和扁平無漿體（A. platys）。建立高效、快速、準(zhǔn)確的診斷方法,對該病的診斷及防控具有重要意義。本研究旨在建立特異性強、靈敏度高、操作簡便且快速的環(huán)介導(dǎo)等溫擴增法（Loop-mediated isothermal amplification, LAMP）以檢測嗜吞噬細胞無漿體和牛無漿體。利用實驗室保存的嗜吞噬細胞無漿體陽性血液DNA樣品建立LAMP方法。使用Primer Explorer V4（http://primerexplorer.jp/elamp4.0.0/index.html）,根據(jù)嗜吞噬細胞無... 

【文章來源】：河南農(nóng)業(yè)大學(xué)河南省

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
摘要
文獻綜述
    引言
    1 病原學(xué)
        1.1 分類學(xué)
        1.2 形態(tài)學(xué)
    2 流行病學(xué)
        2.1 宿主
        2.2 傳播途徑
        2.3 分布與流行特點
    3 診斷方法
        3.1 病原學(xué)診斷
        3.2 血清學(xué)診斷
            3.2.1 補體結(jié)合試驗（CFT）
            3.2.2 卡片凝集實驗（CAT）
            3.2.3 間接免疫熒光抗體實驗（IFA）
            3.2.4 酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）
        3.3 分子生物學(xué)診斷
            3.3.1 常規(guī)PCR
            3.3.2 實時熒光定量PCR技術(shù)（FQ-PCR）
            3.3.3 環(huán)介導(dǎo)等溫擴增法（LAMP）
            3.3.4 反向線狀印跡技術(shù)（RLB）
    4 防治
        4.1 控制傳染源,建立無無漿體疫區(qū)
        4.2 控制傳播媒介蜱
            4.2.1 免疫防治
            4.2.2 遺傳防治
            4.2.3 生物防治
        4.3 預(yù)防醫(yī)源性傳播
        4.4 藥物治療
        4.5 疫苗
第一部分 嗜吞噬細胞無漿體LAMP檢測方法的建立與初步應(yīng)用
    引言
    1 材料與方法
        1.1 蟲種
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器及耗材
        1.4 主要溶液的配制
4溶液">            1.4.1 80mM MgSO₄溶液
            1.4.2 5M Betaine溶液
            1.4.3 LAMP 10×Buffer
            1.4.4 50×TAE緩沖液
            1.4.5 1.5%瓊脂糖
        1.5 DNA的提取
        1.6 引物設(shè)計選擇及合成
    2 LAMP法擴增體系的建立
        2.1 模板量的確定
        2.2 LAMP擴增體系的初步建立
        2.3 常規(guī)PCR方法
        2.4 巢式PCR方法
        2.5 LAMP反應(yīng)的優(yōu)化
            2.5.1 反應(yīng)溫度、時間的優(yōu)化
            2.5.2 反應(yīng)體系組成的優(yōu)化
        2.6 敏感性試驗
        2.7 特異性試驗
        2.8 LAMP擴增產(chǎn)物的酶切鑒定
        2.9 LAMP擴增產(chǎn)物添加熒光染料檢測
        2.10 臨床樣品檢測試驗
        2.11 不同LAMP方法的比較
    3 結(jié)果與分析
        3.1 反應(yīng)溫度、時間的優(yōu)化結(jié)果
        3.2 反應(yīng)體系優(yōu)化結(jié)果
        3.3 特異性試驗結(jié)果與分析
        3.4 敏感性試驗結(jié)果與分析
        3.5 酶切后電泳結(jié)果與分析
        3.6 LAMP擴增產(chǎn)物添加染料及電泳檢測
        3.7 臨床樣品檢測結(jié)果
        3.8 不同LAMP方法的比較
    4 結(jié)論與討論
        4.1 LAMP方法的評價
        4.2 LAMP擴增反應(yīng)體系的優(yōu)化
        4.3 LAMP敏感性和特異性
        4.4 LAMP產(chǎn)物檢測
        4.5 臨床樣品的檢測
        4.6 不同LAMP方法的比較
第二部分 牛無漿體LAMP檢測方法的建立及初步應(yīng)用
    引言
    1 材料與方法
        1.1 蟲種
        1.2 主要試劑和儀器
        1.3 主要溶液的配制
        1.4 DNA的提取
        1.5 引物設(shè)計選擇及合成
    2 LAMP法擴增體系的建立
        2.1 模板量的確定
        2.2 LAMP擴增體系的初步建立
        2.3 常規(guī)PCR方法
        2.4 巢式PCR方法
        2.5 LAMP反應(yīng)的優(yōu)化
            2.5.1 反應(yīng)溫度、時間的優(yōu)化
            2.5.2 反應(yīng)體系組成的優(yōu)化
        2.6 敏感性試驗
        2.7 特異性試驗
        2.8 LAMP擴增產(chǎn)物添加熒光染料檢測
        2.9 臨床樣品檢測試驗
    3 結(jié)果與分析
        3.1 反應(yīng)溫度、時間的優(yōu)化結(jié)果
        3.2 反應(yīng)體系優(yōu)化結(jié)果
        3.3 特異性試驗結(jié)果與分析
        3.4 敏感性試驗結(jié)果與分析
        3.5 LAMP擴增產(chǎn)物添加染料及電泳檢測
        3.6 臨床樣品測結(jié)果
    4 結(jié)論與討論
        4.1 LAMP法檢測牛無漿體方法的建立
        4.2 LAMP擴增反應(yīng)體系的優(yōu)化
        4.3 LAMP特異性和敏感性
        4.4 牛無漿體LAMP方法的檢測效果
結(jié)論與創(chuàng)新點
參考文獻
ABSTRACT
個人簡歷


【參考文獻】：
期刊論文
[1]微小隱孢子蟲LAMP檢測方法的探索[J]. 史亞東,董海聚,王榮軍,張龍現(xiàn),寧長申,菅復(fù)春.  中國人獸共患病學(xué)報. 2012(12)
[2]西藏當(dāng)雄縣無漿體分子流行病學(xué)調(diào)查[J]. 孫彩琴,劉建枝,黃磊,羅布頓珠,汪月鳳,劉志杰,羅建勛,殷宏.  動物醫(yī)學(xué)進展. 2012(10)
[3]牛新孢子蟲病LAMP檢測方法的建立[J]. 金超,賈立軍,曹世諾,欒楊,王娜,李月梅,張守發(fā).  中國獸醫(yī)科學(xué). 2009(12)
[4]立克次體目微生物的系統(tǒng)分類進展[J]. 寶福凱,柳愛華.  中國人獸共患病學(xué)報. 2007(12)
[5]環(huán)媒恒溫基因擴增法檢測藤黃微球菌的研究[J]. 陳宇明,程天印,王曉君.  中國病原生物學(xué)雜志. 2006(06)
[6]蜱類防治研究進展[J]. 高志華,劉敬澤.  寄生蟲與醫(yī)學(xué)昆蟲學(xué)報. 2003(04)
[7]我國牛羊邊蟲及邊蟲病的研究現(xiàn)狀[J]. 黨志勝,蔣錫仕,黃孝玢.  青海畜牧獸醫(yī)雜志. 2003(04)
[8]間接熒光抗體診斷牛邊緣邊蟲病的研究[J]. 余豐,呂文順,張其才,呂文祥,竇惠芳,殷宏.  中國獸醫(yī)科技. 1990(05)
[9]綿山羊邊蟲病的研究——實驗羊邊蟲病的鹽酸土霉素治療[J]. 呂文祥,呂文順,殷宏,張其才,竇惠芳,余豐.  中國獸醫(yī)科技. 1989(12)

碩士論文
[1]綿羊無漿體和牛無漿體實時熒光定量PCR檢測方法的建立[D]. 遲慶安.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[2]羊無漿體PCR診斷方法建立及分子流行病學(xué)調(diào)查[D]. 張菲菲.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[3]1)邊緣無漿體快速診斷試劑盒的研制 2)羊泰勒蟲臨床癥狀、血液學(xué)以及抗體變化的研究[D]. 袁建豐.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005



本文編號：3071915