發(fā)布時間：2021-03-08 03:00

　　背景:miRNA參與調(diào)控了生命過程中各個方面,利用抑制劑對特定miRNA進行抑制研究中的常用手段。通過在體系中引入一段和miRNA序列堿基互補的核苷酸,miRNA抑制劑競爭性吸附miRNA,抑制其對靶基因作用。Tu D（Tough decoys）是目前被證明抑制效果最好的miRNA抑制劑,依賴于全基因合成的Tu D載體構(gòu)建是阻礙Tu D應(yīng)用的瓶頸。目的:載體構(gòu)建過程中引入多重PCR、無縫連接等技術(shù),構(gòu)建成能同時表達Tu D元件的抑制載體dTuD（double Tough decoys）,提高構(gòu)建效率和抑制效率。方法和結(jié)果:在優(yōu)化抑制劑構(gòu)建方面,首先我們將部分Tu D片斷克隆到通用模板載體和受體載體上,通過兩步PCR獲得含MBS（miRNA binding sites）的Tu D片斷后,經(jīng)無縫連接插入到受體載體中,構(gòu)建成dTuD載體。3’UTR熒光素酶報告實驗證明dTuD能夠抑制外源性miR-223。針對miR-195,-497,-322進行dTuD抑制,通過q RT-PCR和WB證明dTuD能夠抑制內(nèi)源性miRNA。在C2C12細胞中感染dTuD-miR-195和dTuD-miR-49... 

【文章來源】：深圳大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：92 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
縮略詞表
microRNA高效抑制劑的簡易制備新方法
    摘要
    Abstract
    第一章 前言
        1.1 micro RNA研究概述
        1.2 miRNA抑制劑
        1.3 不同miRNA抑制劑的比較
        1.4 本課題研究目的
    第二章 實驗材料和方法
        2.1 材料和試劑
        2.2 儀器
        2.3 方法
    第三章 結(jié)果和分析
        3.1 dTuD載體構(gòu)建流程
        3.2 dTuD抑制miRNA具有滴度效應(yīng)
        3.3 dTuD抑制特異性
        3.4 dTuD抑制外源性miRNA
        3.5 dTuD抑制內(nèi)源性miRNA
        3.6 dTuD應(yīng)用于篩選與AP-1 信號通路相關(guān)的miRNA
        3.7 dTuD應(yīng)用于小鼠抑制miR-1，使其下游基因Myogenin表達下調(diào)
    第四章 討論
        4.1 dTuD載體構(gòu)建方式的優(yōu)化
        4.2 dTuD載體表達形式的優(yōu)化
        4.3 抑制效果的評估方式
        4.4 Tu D載體的進一步優(yōu)化
    第五章 結(jié)論
miR-195/497 對骨骼肌發(fā)育的調(diào)控
    摘要
    Abstract
    第一章 前言
        1.1 骨骼肌發(fā)育與成肌分化
        1.2 成肌分化的調(diào)控機制
        1.3 miRNA-195/497
        1.4 選題的目的和意義
    第二章 實驗材料和方法
        2.1 材料和試劑
        2.2 方法
    第三章 結(jié)果和分析
        3.1 豬發(fā)育過程中miRNA表達譜繪制
        3.2 miR-195/497 在豬不同肌肉樣本，小鼠發(fā)育過程中以及小鼠成肌細胞分化過程中的表達上調(diào)
        3.3 miR-195/497 抑制C2C12細胞增殖而促進成肌分化
        3.4 miR-195/497 直接靶向HMGA1的 3’UTR抑制其表達
        3.5 miR-195/497 抑制Id家族表達量
        3.6 miR-195/497 受到甲基化調(diào)控
    第四章 討論
        4.1 miR-195/497 通過靶基因HMGA1調(diào)控成肌分化
        4.2 表達譜中的其他miRNA可能也參與了成肌分化
        4.3 miR-195/497-HMGA1-Id中更為復(fù)雜的調(diào)控機制
        4.4 miR-195/497 在肌肉發(fā)育和肌肉損傷修復(fù)中的應(yīng)用展望
    第五章 結(jié)論
參考文獻
附錄
致謝
碩士期間發(fā)表論文



本文編號：3070294