NAD+/NADH是所有生物體不可缺少的輔因子,作為細(xì)胞能量代謝所必需的輔酶,參與所有生命體的代謝活動(dòng)。NAD+參與的基礎(chǔ)代謝曾被報(bào)道與病原菌的毒力相關(guān),本研究初步探索2型豬鏈球菌（Streptococcus suis serotype 2,S.suis 2）中NAD+代謝的信號(hào)通路及其調(diào)控機(jī)制,探究NrtR調(diào)節(jié)子與其毒力的關(guān)系,為發(fā)現(xiàn)新的藥物靶點(diǎn)、預(yù)防治療豬鏈球菌病提供理論依據(jù)。主要研究結(jié)果如下:（1）通過(guò)生物信息學(xué)同源比對(duì)發(fā)現(xiàn),在2型豬鏈球菌中,操縱子nadR-punC-nrtR編碼NAD.+的補(bǔ)救合成途徑,其中調(diào)控因子NrtR同源蛋白負(fù)責(zé)調(diào)控該操縱子的表達(dá)。同時(shí),在2型豬鏈球菌中可能存在另一條補(bǔ)救途徑,PncA所在的補(bǔ)救途徑,這條途徑由另一調(diào)節(jié)子NiaR負(fù)責(zé)調(diào)控。通過(guò)生物信息學(xué)分析可知,NrtR蛋白屬于Nudix家族,由N端的Nudix結(jié)構(gòu)域和C端的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域組成。采用Ni-NTA親和層析法和分子篩純化重組蛋白,化學(xué)交聯(lián)和分子篩都顯示作為調(diào)控因子的NrtR以二聚體的形式存在。（2）Electrophoretic mobility shift assay（EMSA）試驗(yàn)證明了... 

【文章來(lái)源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：128 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１．２突變體Ａｎｒｒｆ？的構(gòu)建??Ｆｉｇ．?１．２?Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ＡｎｒｔＲ?ｍｕｔａｎｔ??

途徑基因和ｗｒｉ？的同源基因，且三個(gè)基因彼此重疊形成一個(gè)操縱子，??ＮｒｔＲ?蛋白預(yù)測(cè)的?ＤＮＡ?結(jié)合位點(diǎn)（ｈｔｔｐ：／／ｒｅｇｐｒｅｃｉｓｅ．ｌｂｌ．ｇｏｖ／ＲｅｇＰｒｅｃｉｓｅ），位于該操縱??子的上游（圖１．３Ａ），表明ＮｒｔＲ可能是一個(gè)自調(diào)控子，可調(diào)控自身的表達(dá)。；??基因編碼一個(gè)假定的Ｎ－核糖煙酰胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白［３２］，而基因產(chǎn)物ＮａｄＲ具有兩種??酶學(xué)活性：核苷激酶活性（ＮｍＲ－Ｋ），主要通過(guò)磷酸化將ＮｍＲ轉(zhuǎn)變?yōu)椋危停危郏常玻荩??另一個(gè)是腺苷轉(zhuǎn)移酶活性（ＮＭＮ－ＡＴ），負(fù)責(zé)催化ＮＭＮ轉(zhuǎn)化為ＮＡＤ。因此，ｐｎｗＣ??和；＾漢基因編碼了?ＲＮａｍ－ＮＡＤ這條補(bǔ)救途徑所必需的催化功能［３２］。??Ｒｏｄｉｏｎｏｖ等人［３１］研究報(bào)道，鏈球菌科缺乏ＮＡＤ的從頭合成途徑［３１］，通過(guò)對(duì)??ＮＡＤ從頭合成基因ｍｃＷ、及的同源比對(duì)分析，我們發(fā)現(xiàn)在５１．?？ｓｗｈ〗中??確實(shí)缺乏這些從頭合成途徑的基因，這與Ｒｏｄｉｏｎｏｖ等人的報(bào)道是一致的。Ｂｉ等人??［５３］報(bào)道，煙酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ＮｉａＸ存在于四梭菌屬、糞腸球菌及所有的鏈球菌科中［５３］，??且多數(shù)含有ＮｉａＸ的菌種缺乏ＮＡＤ的從頭合成途徑（天冬氨酸途徑）

Ｓ．?ｖｅｓｔｉｂｕｌａｒｉｓ、Ｓ．?ｔｈｅｎｎｏｐｈｉｌｕｓ?和?Ｍｉｔｉｓ?ｇｎｏｗｐ?＿?的?Ｓ．?ｍｉｔｉｓ、Ｓ．?ｓａｎｇｕｉｎｉｓ、Ｓ．?ｇｏｒｄｏｎｉｉ??進(jìn)行多序列比對(duì)分析，結(jié)果顯示，Ｓ．？以２的ＮｒｔＲ蛋白與唾液鏈球菌組和輕型鏈??球菌組的該蛋白具有一定同源性（圖１．５Ｂ），其一級(jí)結(jié)構(gòu)氨基酸序列及二級(jí)空間結(jié)??構(gòu)均有一定相似性。??２３??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]豬鏈球菌2型HA0609的分離及致病性研究[J]. 呂立新,何孔旺,倪艷秀,俞正玉,茅愛華.  畜牧與獸醫(yī). 2013(02)



本文編號(hào)：3068977