發(fā)布時(shí)間：2021-03-07 03:00

　　奶牛鏈球菌性乳房炎是奶牛乳房炎的常見(jiàn)類(lèi)別之一。鏈球菌屬致病菌感染奶牛乳房后所引起的臨床癥狀不明顯從而不易被牛場(chǎng)察覺(jué),但鏈球菌性乳房炎所造成的危害卻極大,最直觀的經(jīng)濟(jì)損失是奶牛乳產(chǎn)量下降,牛奶品質(zhì)變差。同時(shí)牛奶中的炎性因子與致病菌、毒素也對(duì)消費(fèi)者健康會(huì)造成威脅。準(zhǔn)確、快速的致病菌檢測(cè)是治療與控制乳房炎的前提,不僅能夠有效降低經(jīng)濟(jì)損失,避免抗生素濫用,而且可減少耐藥菌株出現(xiàn)與牛奶中的藥物殘留率。由于鏈球菌對(duì)青霉素、氨芐青霉素、萬(wàn)古霉素等多種抗生素均敏感且治療效果明顯,因此,開(kāi)發(fā)建立一種方便快捷的檢測(cè)鏈球菌性乳房炎致病菌的技術(shù)不僅具有較高的應(yīng)用價(jià)值,是奶牛場(chǎng)乳房炎防控措施中的一項(xiàng)重要內(nèi)容,同時(shí)也有著公共衛(wèi)生學(xué)意義。傳統(tǒng)的鏈球菌培養(yǎng)要求條件高,分離鑒定難度大；PCR方法敏感、快速但依賴(lài)于昂貴復(fù)雜的精密儀器,難以在條件較差的基層推廣普及使用。環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（LAMP）作為新型的體外核酸擴(kuò)增技術(shù),具有高特異性、高靈敏性,簡(jiǎn)便快速、成本低,對(duì)儀器設(shè)備的要求簡(jiǎn)單的特點(diǎn),在臨床與現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)診斷方而,顯示了其突出的優(yōu)越性本試驗(yàn)采用環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增可視化技術(shù)快速檢測(cè)鏈球菌性乳房炎致病菌。針對(duì)鏈球菌屬細(xì)菌的高... 

【文章來(lái)源】：廣西大學(xué)廣西壯族自治區(qū) 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：90 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

乳房炎分類(lèi)(根據(jù)不同泌乳階段、臨床癥狀及偵原素）

圖3 LAMP引物問(wèn)距Fig.3 Distance between each primer of LAMP2、引物區(qū)的Tmfl對(duì)于GC禽貴豐富或GC禽量正常的基W序列，引物區(qū)的Tm仿應(yīng)控制在60?65°C ；對(duì)于AT富集的序列，引物區(qū)的Tm位則應(yīng)控制在55?60°C。在設(shè)計(jì)各區(qū)域引物時(shí)，應(yīng)將Flc與Bic的Tmtft控制在65°C (64?66°C之問(wèn)）；F2B2、F3與B3的Tm位控制在60°C (59?61 °C之問(wèn))；LF與LB的Tm位保持在65°C - 66°C之問(wèn))。此外，F(xiàn)lc與BIg的Tm應(yīng)稍高于F2與B2，這有助于擴(kuò)柄過(guò)程巾單模板釋放后立刻形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)。3、引物GC禽量LAMP引物的GC含量控制在40?65%之內(nèi)為rr, J1；巾GC含量在50?60%吋為域佳，設(shè)計(jì)引物的質(zhì)量耍相對(duì)更好一些。4、引物末端的穩(wěn)定性

閣4 LAMP反丨Wte迎循環(huán)模板介成階段iP驟一Fig.4 Part 1 of reaction principle of LAMP如圖5-A所示，外引物F3從內(nèi)引物FIP的外側(cè)與模板DNA上的F3c L><:段結(jié)合，在A打鏈背換作爪的Bst DNA聚合酶的引導(dǎo)下，一邊將之前111內(nèi)引物FIP所合成的DNA鏈剝離、釋放，一邊以外引物F3的3’末端為起點(diǎn)合成新的模板DNA的互補(bǔ)鏈（見(jiàn)圖5-B)。/ *、 y F2c ￡K 81 B2 aj 5’(\ ' 產(chǎn)ml丨丨丨 |丨?|||l||iT|1i|i|||||iiiiiii III II "IIIIIIIIIII圃_■__■丨議MIMIIIIIIIIiiiiiiiiiii丨丨丨丨丨|nilI mil nili'rmtf W rt n sk nic 03? rS，F(xiàn)lc暴FJc F2c Flc Bl B2 B3 Vnqm 鄉(xiāng) -/. _. V. M w^mFJ F2 Fl Blc Blc B3c i'


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