褪黑素（N-乙�；�-5-甲氧基色胺,melatonin）主要是由動物松果體分泌的胺類激素,作用于全身的多個器官、組織、細胞,具有調(diào)節(jié)生物節(jié)律、改善睡眠,調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)、增強免疫力,調(diào)控生殖活動,抗氧化作用,抗衰老功能,抗腫瘤功能及清除體內(nèi)自由基等多種生理和藥理作用。芳烷基胺N-乙�；D(zhuǎn)移酶（AANAT）是脊椎動物中褪黑素生物合成的主要限速酶。本研究利用轉(zhuǎn)基因技術,將AANAT基因轉(zhuǎn)入奶山羊的基因組中,一是生產(chǎn)全身過表達AANAT的奶山羊,并以此為模型研究內(nèi)源高水平褪黑素對個體繁殖和免疫的影響;二是培育出乳腺特異性過表達AANAT的奶山羊,并生產(chǎn)高水平褪黑素羊奶。利用體細胞核移植轉(zhuǎn)基因技術生產(chǎn)全身過表達AANAT的嶗山奶山羊。首先成功構建pIRES2-EGFP-AANAT和CAG-AANAT全身表達載體。采集35d左右的嶗山奶山羊胎兒,并利用組織塊貼壁培養(yǎng)法分離培養(yǎng)嶗山奶山羊胎兒成纖維細胞。利用電穿孔方法轉(zhuǎn)染胎兒成纖維細胞,經(jīng)G418及綠色熒光篩選后,挑出陽性單克隆細胞系,擴大培養(yǎng)并進行DNA水平的陽性鑒定,mRNA水平和蛋白水平的表達檢測,選出3個細胞系作為核移植供體細胞。通過對33只奶... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)大學北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：106 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

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５－芙全色氣Ｉ髮（５－ｈｙｄｉ．ｏｘｙｔｒｙｐｔｏｐｌｉａｎ）??ＡＡＡＤ?！??５－輕色胺（Ｓｅｒｏｔｏｎｉｎ）??ＡＡＮＡＴ??Ｎ－乙酸－５－輕色胺（Ｎ－ａｃｔｙｌｓｅｒｏｔｏｍｎ）??ＨＩＯＭＴ??褪黑素（Ｍｅｌａｔｏｎｉｎ）??圖２褪黑素的生物合成??Ｆｉｇｕｒｅ?２?Ｍｅｌａｔｏｎｉｎ?ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ?ｐａｔｈｗａｙ??１．１．３褪黑素合成限速酶??芳院基胺Ｎ－乙酰站轉(zhuǎn)移＿?（ＡＡＮＡＴ）是褪黑索＿＇ｌ：物合成屮的倒數(shù)第ｉ?：位合成酶（Ｆａｌｃ６ｎ?ｅｔ?ａｌ．，??２００９），催化５－羥色胺生成Ｎ－乙酰－５－羥色胺（閹３），以脊推動物中槌黑素生物合成的主要限速酶??（Ｂｌｏｍｅｋｅ?ｅｔ?ａｌ．．?２００８；?Ｚｈｅｎｇ?ｅｔ?ａｌ．．?２００１），??ＮＨ２??

子和細胞功能。從此，顯微注射法、精子載體法、１ＣＳＩ介導的轉(zhuǎn)基因、原始生殖細胞（ＰＧＣｓ）??法、胚胎干細胞法、慢病毒載體法、轉(zhuǎn)座子轉(zhuǎn)基因法、ＲＮＡ干擾、體細胞核移植及其他基因編輯??方法已成功用于生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因小鼠和其他轉(zhuǎn)基因動物物種（圖４）。由于未解決的技術和安全問題，??各自都有其優(yōu)點和缺點，需要進一步研究。目前原核胚顯微注射和體細胞核移植是生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因家??畜常用的方法。??一？?＾Ｍａｌｅ??＾?Ｍｅｔａｐｈａｓｅ?ＩＩ?＼?＜?１??（ｆ?）?ｏｏｃｙｔｅｓ?Ｖ＇??Ａ）?Ｏｏｃｙｔｅ?Ｂ）?Ｚｙｇｏｔｅ?Ｖ?Ｃ）?Ｓｐｅｒｍ－ｍｅｄｉａｔｅｄ??－，?ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｇｅｎｅ?ｔｒａｎｓｆｅｒ??＾??＾?ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ?Ｖ－／?ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ??Ｖ?ＤＮＡ／ＲＮＡ／ｔｅｎｌｉｖｉｒａｌ?ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ?心?；?＾??０—?＾０?ｃ）?Ｏ?Ｏ??Ｎｕｄｔｔａｒ?ａ）?ｂ）?Ｃ）?ｄ）??ｔｒａｎｓｆｅｒ?Ｐｒｏｎｕｃｔｏａｒ?Ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ?ＰｏｒＭｅＨｉｎｅ?Ｅｌｅｃｔｒｏｐｏｒａｔｉｏｎ??（ＳＣＮＴ）?ｉｎ｜ｅｃｔｉｏｏ?ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ?ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ?〇（?ｎｕｃｌｅａｓｅｓ??（ＤＮＡ．?ＴＳ．?ＲＮＡ．?（ＺＦＮ，?ＴＡＬＥＮ．?（Ｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ）?（２ＦＮ．?ＴＡｔＥＮ．??ＺＦＮ．?ＴＡＬＥＮ．?ＣＲＩＳＰＲ）?ＣＲＩＳＰＲ）??ＣＲＩＳＰＲ）???Ｉ?Ｉ?｜?｜???ｒ￣??／ｎ

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3068015