肝臟代謝和骨骼肌發(fā)育是雞十分重要的兩個生物過程,microRNA（miRNA）是一類小的非編碼的約22個核苷酸長度的單鏈RNA分子,是基因表達的重要調(diào)控因子,其對肝臟代謝和骨骼肌發(fā)育發(fā)揮了重要的作用。本研究以雞肝臟和骨骼肌miRNA為研究對象,對其進行了一系列的表達和功能研究,主要研究結(jié)果如下：（1）運用實時熒光定量PCR檢測miR-122的組織表達,發(fā)現(xiàn)其在肝臟中表達量最高。運用靶基因預(yù)測軟件預(yù)測出364個miR-122的靶基因,挑選其中與肝臟代謝相關(guān)的預(yù)測靶基因P4HA1、PKM2、TGF-β3、FABP5和ARCN1。實時熒光定量PCR顯示miR-122在肝臟生長發(fā)育過程中上調(diào),在雞肝細胞離體培養(yǎng)過程中下調(diào),5個基因在肝臟生長發(fā)育過程中表達不受影響,P4HA1、TGF-β3和ARCN1在肝細胞離體過程中下調(diào),而FABP5在離體和培養(yǎng)過程中分別下調(diào)和上調(diào),PKM2不受影響。體外雙熒光素酶報告系統(tǒng)和靶位點突變實驗證明5個基因及預(yù)測靶位點分別是miR-122的靶基因和靶位點,通過雞細胞系過表達miR-122證明其對TGF-β3的調(diào)控在mRNA水平,而對P4HA1、PKM2和ARCN1的... 

【文章來源】：揚州大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：144 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 文獻綜述
    1.1 肝臟和肌肉中miRNA研究進展
        1.1.1 miRNA的生物合成、作用機制和靶基因鑒定
        1.1.2 miR-122
        1.1.3 miR-126
        1.1.4 miR-1a
        1.1.5 miR-133a
    1.2 畜禽miRNA研究進展
        1.2.1 牛miRNA
        1.2.2 雞miRNA
        1.2.3 豬miRNA
        1.2.4 羊miRNA
        1.2.5 畜禽miRNA研究展望
    1.3 miRNA相關(guān)研究技術(shù)
        1.3.1 實時熒光定量PCR
        1.3.2 miRNA靶基因預(yù)測
        1.3.3 miRNA靶基因驗證
        1.3.4 高通量測序
        1.3.5 RNA干擾
    1.4 本研究的目的及意義
2 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗樣品
        2.1.2 實驗儀器
        2.1.3 實驗試劑
        2.1.4 實驗引物及核酸
    2.2 實驗方法
        2.2.1 miRNA及基因表達分析
        2.2.2 miRNA靶基因驗證
        2.2.3 抑制miR-122的原代雞肝細胞基因分析
        2.2.4 TGF-β3 RNAi
        2.2.5 GH處理的原代雞肝細胞miRNA測序
        2.2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 雞miR-122功能研究
        3.1.0 miR-122組織表達特征
        3.1.1 miR-122靶基因預(yù)測
        3.1.2 miR-122及靶基因在不同生長發(fā)育時期雞肝臟中表達特征
        3.1.3 miR-122及靶基因在原代雞肝細胞中表達特征
        3.1.4 miR-122靶基因驗證
        3.1.5 抑制miR-122的原代雞肝細胞基因表達研究
        3.1.6 干擾TGF-β3的原代雞肝細胞基因表達研究
    3.2 雞miR-126功能研究
        3.2.1 miR-126組織表達特征
        3.2.2 miR-126靶基因預(yù)測
        3.2.3 miR-126及靶基因在不同生長發(fā)育時期雞肝臟中表達特征
        3.2.4 miR-126及靶基因在原代雞肝細胞中表達特征
        3.2.5 miR-126靶基因驗證
    3.3 GH處理的原代雞肝細胞miRNA表達研究
        3.3.1 GH處理原代雞肝細胞后IGF-I表達升高
        3.3.2 GH處理的原代雞肝細胞miRNA測序研究
    3.4 雞miR-1a功能研究
        3.4.1 miR-1a組織表達特征
        3.4.2 miR-1a靶基因預(yù)測
        3.4.3 miR-1a及靶基因在不同生長發(fā)育時期雞骨骼肌中表達特征
        3.4.4 miR-1a靶基因驗證
    3.5 雞miR-133a功能研究
        3.5.1 miR-133a組織表達特征
        3.5.2 miR-133a靶基因預(yù)測
        3.5.3 miR-133a及靶基因在不同生長發(fā)育時期雞骨骼肌中表達特征
        3.5.4 miR-133a靶基因驗證
4 討論
    4.1 雞miR-122功能研究
        4.1.1 miR-122組織表達特征
        4.1.2 miR-122靶基因預(yù)測
        4.1.3 miR-122及靶基因在不同生長發(fā)育時期雞肝臟中表達特征
        4.1.4 miR-122及靶基因在原代雞肝細胞中表達特征
        4.1.5 miR-122靶基因驗證
        4.1.6 抑制miR-122的原代雞肝細胞基因表達研究
        4.1.7 干擾TGF-β3的原代雞肝細胞基因表達研究
    4.2 雞miR-126功能研究
        4.2.1 miR-126組織表達特征
        4.2.2 miR-126靶基因預(yù)測
        4.2.3 miR-126及靶基因在不同生長發(fā)育時期雞肝臟中表達特征
        4.2.4 miR-126及靶基因在原代雞肝細胞中表達特征
        4.2.5 miR-126靶基因驗證
    4.3 GH處理的原代雞肝細胞miRNA表達研究
        4.3.1 cGH處理原代雞肝細胞的效果
        4.3.2 GH處理的原代雞肝細胞miRNA測序
    4.4 雞miR-1a功能研究
        4.4.1 miR-1a組織表達特征
        4.4.2 miR-1a靶基因預(yù)測
        4.4.3 miR-1a及靶基因在不同生長發(fā)育時期雞骨骼肌中表達特征
        4.4.4 miR-1a靶基因驗證
    4.5 雞miR-133a功能研究
        4.5.1 miR-133a組織表達特征
        4.5.2 miR-133a靶基因預(yù)測
        4.5.3 miR-133a及靶基因在不同生長發(fā)育時期雞骨骼肌中表達特征
        4.5.4 miR-133a靶基因驗證
5 結(jié)論
參考文獻
附錄
致謝
攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表的論文


【參考文獻】：
期刊論文
[1]miR-133a在結(jié)腸癌組織中的表達[J]. 謝海濤.  廣東醫(yī)學(xué). 2012(15)
[2]miR-133a在乳腺癌組織中的表達及其臨床意義[J]. 項茹,吳正升,張晴,徐曉春,吳強.  安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2011(02)
[3]microRNA在肌肉發(fā)育中的功能研究進展[J]. 王星果,郁建鋒,顧志良.  生命科學(xué). 2010(02)
[4]RNA干擾原理及其在腫瘤研究中的應(yīng)用[J]. 黃坤寨,蔡建春.  醫(yī)學(xué)綜述. 2010(01)
[5]成年雞肝細胞的分離與原代培養(yǎng)[J]. 陳黎龍,江青艷,朱曉彤,束剛,高淑靜,高萍,張永亮.  江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2008(03)



本文編號：3063304