食源性致病菌作為主要影響因素引起的一系列食物中毒事件,嚴(yán)重的影響了我國的食品安全。沙門氏菌是較為常見的食源性致病細(xì)菌之一,廣泛存在于未經(jīng)消毒的蔬菜、水果、牛奶等。沙門氏菌既能造成家畜、家禽的死亡,作為傳染源又長期存于禽畜產(chǎn)品中,嚴(yán)重的威脅人類的健康及食品安全。然而,一般常見的檢測方法存在操作繁瑣、耗時長、需要大型的操作儀器,花費昂貴以及檢測的靈敏性低,特異性不穩(wěn)定等一系列問題。因此,為了改善一般常見的檢測方法的不足,建立一種快速、靈敏、便攜的沙門氏菌等食源性致病菌的檢測方法,對于維護我國食品安全尤為重要。核酸夾心ELISA對沙門氏菌可視化檢測方法的建立。試驗以鏈霉親和素標(biāo)記的微孔板為反應(yīng)平臺,根據(jù)檢測靶標(biāo)沙門氏菌標(biāo)準(zhǔn)序列設(shè)計標(biāo)記biotin的抓取探針CP和標(biāo)記FITC的檢測探針DP,通過生物素與鏈霉親和素的特異性結(jié)合,使得抓取探針CP固定在微孔板上,抓取探針CP將靶標(biāo)固定到微孔板上,標(biāo)記FITC的檢測探針DP與靶標(biāo)結(jié)合并間接偶聯(lián)于微孔板上,anti-FITC-HRP與檢測探針DP標(biāo)記的FITC結(jié)合,HRP催化底物TMB顯色的作用達(dá)到定量監(jiān)測靶標(biāo)的作用。實驗中對反應(yīng)條件進行優(yōu)化:確定抓取... 

【文章來源】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)吉林省

【文章頁數(shù)】：46 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

核酸夾心ELISA對沙門氏菌檢測方法的原理圖

每個微孔中的顏色反應(yīng)，及酶標(biāo)儀的檢測數(shù)據(jù)分析，判斷最終.4 特異性的檢測本研究設(shè)計合成了與沙門氏菌特異核酸區(qū)別的大腸桿菌 O157、金黃色葡萄球菌、弗氏檸檬酸桿菌、單增李斯特菌的特異核，用于檢測本試驗方法的特異性。 實驗結(jié)果.1 抓取探針最佳孵育時間的檢測結(jié)果孵育時間的長短直接影響生物素與固相 96 孔板上鏈霉親和素條件下，孵育時間過短，抓取探針不能夠完全與反應(yīng)板結(jié)合，的信號值會相對較低。沙門氏菌特異核酸的濃度為 10 nmol/L 0.1 μmol/L，抓取探針的孵育時間一次是 0 h，1 h，2 h，3 1.2 中的線性分析所示，孵育時間為 2 h 時，反應(yīng)吸光度值最。隨著孵育時間的增加，反應(yīng)信號值有所下降，故 2 h 為最佳時間。

圖 1.3 Anti-FITC-HRP 孵育時間對反應(yīng)效果的影響g.1.3 The efficiency of anti-FITC-HRP incubating time檢驗一種檢測方法的重要判定條件。將 0.5 μmol/L 的 CP 加到；分別將沙門氏菌等幾種食源性致病菌的特異核酸序列稀釋成們分別與 DP (0.5 μmol/L)的雜交，混合液孵育 30 min；加的 anti-FITC-HRP 反應(yīng) 2 h，最后加入了 TMB 底物，進行結(jié)果的 1.4 中的檢測結(jié)果可知，相對于其他幾種食源性致病菌，沙門氏明顯，且表示出了較強的信號值。其他幾種菌的顯色結(jié)果幾乎沒幾乎沒有吸光值變化，所以該檢測方法有較好的特異性。

【參考文獻】：
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本文編號：3062677