發(fā)布時間：2021-03-04 03:38

　　β溶血素（β-hemolysin,Hlb）在金黃色葡萄球菌感染奶牛乳腺的致病過程中起到了重要的作用,但是關(guān)于牛源抗β溶血素的免疫制劑研究較少。本研究首先以金黃色葡萄球菌ATCC25923的DNA為模板,利用PCR技術(shù)擴增編碼β溶血素的基因hlb,構(gòu)建原核表達質(zhì)粒pET32a-hlb,并在大腸桿菌BL21（DE3）中誘導(dǎo)表達重組Hlb蛋白。以純化的重組Hlb蛋白為包被抗原,從牛源噬菌體單鏈抗體表達文庫中篩選到了一株針對β溶血素高親和力單鏈抗體（single-chain variable fragment, scFv）,通過構(gòu)建原核表達質(zhì)粒pET32a-scFv在大腸桿菌Transetta中誘導(dǎo)表達。結(jié)果表明,重組Hlb蛋白具有良好的溶解奶牛紅細胞的能力,抗β溶血素單鏈抗體可以顯著抑制重組Hlb蛋白和金色葡萄球菌培養(yǎng)物上清的溶血作用。本研究一方面為研制抗金色葡萄球菌所致奶牛乳腺炎新型抗體制劑提供參考,另一方面也為深入研究β溶血素在金色葡萄球菌致病過程的作用奠定基礎(chǔ)。 

【文章來源】：畜牧與獸醫(yī). 2020,52(04)北大核心

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

單鏈抗體蛋白的純化

Ni-NTA柱純化重組Hlb蛋白

重組質(zhì)粒pET32a-hlb經(jīng)BamHⅠ和XhoⅠ雙酶切后可見5 900 bp的載體片段和891 bp左右的目的片段(圖1),且測序結(jié)果顯示與ATCC25923基因序列同源性達100%,說明重組質(zhì)粒構(gòu)建成功。2.2 重組Hlb蛋白的誘導(dǎo)表達及純化

【參考文獻】：
期刊論文
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[3]Staphylococcus aureusβ-hemolysin-neutralizing single-domain antibody isolated from phage display library of Indian desert camel[J]. Jangra Pooja,Singh Ajit.  Asian Pacific Journal of Tropical Medicine. 2010(01)
[4]牛乳中金黃色葡萄球菌山東分離株（zfb）β-溶血素（hlb）的克隆、表達及溶血活性分析[J]. 楊欽,王長法,楊宏軍,楊少華,高運東,仲躋峰,彭廣能.  中國農(nóng)業(yè)科學(xué). 2009(01)

碩士論文
[1]牛源性重組金黃色葡萄球菌β-溶血素亞單位疫苗對金黃色葡萄球菌誘導(dǎo)的乳腺內(nèi)感染小鼠的保護研究[D]. 魏春梅.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010



本文編號：3062492