目前,很多研究表明轉(zhuǎn)基因克隆動物中DNA甲基化表現(xiàn)為多相的。但是,很少有研究證明轉(zhuǎn)基因體細(xì)胞克隆綿羊中的DNA甲基化水平,可能主要是由于缺少轉(zhuǎn)基因體細(xì)胞克隆綿羊的材料,或者綿羊基因組中的印記基因的信息。為了研究轉(zhuǎn)基因體細(xì)胞克隆綿羊重編程的程度,本研究中以印記基因H19, IGF2, IGF2R, DLK1和Gtl2為研究對象,研究其CpG島或者差異甲基化區(qū)域（differentially methylated regions,DMR）在轉(zhuǎn)基因體細(xì)胞克隆綿羊不同組織（心臟、肺臟、肌肉）DNA甲基化程度。首先,制作石蠟切片、HE染色觀察心臟、肺臟、肌肉的形態(tài)；然后利用生物信息學(xué)軟件或者在線數(shù)據(jù)庫分析以上5個印記基因,包括基因結(jié)構(gòu)、CpG島預(yù)測、蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)預(yù)測、構(gòu)建分子進(jìn)化樹；接著,利用MassArray平臺檢測了5個印記基因在3種不同組織的甲基化水平；最后,根據(jù)獲得的甲基化數(shù)據(jù),進(jìn)行了深度數(shù)據(jù)挖掘分析。通過以上實驗,得到的結(jié)果如下：1.轉(zhuǎn)基因體細(xì)胞克隆綿羊死產(chǎn)綿羊心臟、肺臟、肌肉3種組織經(jīng)病理組織形態(tài)學(xué)觀察沒有明顯異常,總體器官形態(tài)正常。2.五個印記基因中11個CpG島,包括基因上游序列、... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：130 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

印記的生命周期[48]

圖3 Igf2/m9和Igf2r/Airn印記調(diào)控原理Fig.3 Imprinted regulation of Igf2/H 19 and Igf2r/Airn loci1.3.5.2 Igf2r/Airn雖然不是進(jìn)化最古老的，但是在IgGr/Airn簇中ncRNA模式是一個通用機(jī)制，可能也是被描述的最完整的（見圖3b)。另外兩個確定的簇是IC2/Kcnql 簇和 Gnas 簇，可能 PWS/AS 和 DllcI/Dio3 也利用 ncRNA 模式，但是需要更多的研宄工作來確定ncRNA在這些印記基因簇中的作用"“〕。在ncRNA模式中，ICR內(nèi)的啟動子不同程度甲基化調(diào)控著ncRNA的表達(dá)：當(dāng)ICR未甲基化，ncRNA表達(dá)，順式連鎖基因被抑制，另一面，當(dāng)ICR甲基化，ncRNA被抑制，.順式連鎖基因表達(dá)。在丨gf2r/Airn簇中，ncRNAAim抑制IgfZr無處不在，Slc22a2和Slc22a3在胎盤。雖然這種抑制機(jī)制不清楚，一種假設(shè)認(rèn)為在胎盤中Airn與Slc22a3啟動子、H3K9組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶G9a相互作用導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄表觀遺傳沉默在鼠和人中，Igf2r/Airn簇的調(diào)控機(jī)制有些差異。在鼠中，IgfZr母系

內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文 1J_甲基化。當(dāng)母本中DMR2的DNA甲基化被維持，則不會激活H3K4的甲基化，在父本中也是DMR2，不過這促進(jìn)了 Airn轉(zhuǎn)錄的沉默[^。1.3.5.3 Dlkl-Dio3DLK1-D103簇通過DNA甲基化和核心組蛋白的尾部修飾來調(diào)控親本不同染色體的印記調(diào)控區(qū)域，而大多數(shù)研宄多是針對印記域內(nèi)的DNA甲基化和組蛋白修飾，并且己經(jīng)證明了，印記域ICR的DNA甲基化確實維持正確的基因組印記，而且ICR內(nèi)的microRNA也可能參與印記調(diào)控。(a) (b)

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號：3059080