發(fā)布時(shí)間：2021-02-28 00:19

　�、鲂头置谙到y(tǒng)（Type VI secretion system, T6SS）是新近發(fā)現(xiàn)的存在于革蘭氏陰性菌變形菌門(mén)部分致病菌中的一種蛋白質(zhì)分泌系統(tǒng),是這類細(xì)菌的一種重要毒力因子。T6SS是由15-25個(gè)基因編碼的蛋白形成的貫穿細(xì)菌“內(nèi)膜-周質(zhì)空間-外膜”的跨膜復(fù)合結(jié)構(gòu),其形成的管道能直接穿過(guò)靶細(xì)胞的生物膜發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng),作用的靶細(xì)胞既可以是原核細(xì)胞,也可以是真核細(xì)胞。溶血素共調(diào)節(jié)蛋白（Hemolysin-Coregulated Protein, Hcp）是形成T6SS分泌裝置的通道的結(jié)構(gòu)蛋白,同時(shí)也是對(duì)靶細(xì)胞產(chǎn)生生物學(xué)效應(yīng)的重要的效應(yīng)蛋白,被認(rèn)為是T6SS的分子標(biāo)志（hallmark）。腸外致病性大腸桿菌（Extraintestinal pathogenic Escherichia coli, ExPEC）是類重要的人畜共患傳染病病原,能引起人和動(dòng)物腸道以外多種組織器官病變。近年來(lái),許多豬場(chǎng)發(fā)生腦膜炎、肺炎、關(guān)節(jié)炎、敗血癥等疾病的豬只ExPEC的分離率呈上升趨勢(shì),這類菌株往往具有較強(qiáng)的耐藥性,給養(yǎng)殖場(chǎng)疾病的防控帶來(lái)很大的困難,同時(shí)造成養(yǎng)殖場(chǎng)較大的損失。本研究在前期對(duì)5株豬源ExPEC進(jìn)... 

【文章來(lái)源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：55 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 革蘭氏陰性菌蛋白質(zhì)分泌系統(tǒng)的概述
    1.2 Ⅵ型分泌系統(tǒng)的研究進(jìn)展
        1.2.1 Ⅵ型分泌系統(tǒng)的概述
        1.2.2 Ⅵ型分泌系統(tǒng)分子結(jié)構(gòu)的研究進(jìn)展
        1.2.3 Ⅵ型分泌系統(tǒng)功能的研究進(jìn)展
        1.2.4 大腸桿菌Ⅵ型分泌系統(tǒng)的研究進(jìn)展
    1.3 腸外致病性大腸桿菌的研究進(jìn)展
2 研究目的與意義
3 材料與方法
    3.1 材料
        3.1.1 菌株、質(zhì)粒、細(xì)胞
        3.1.2 酶及其它試劑
        3.1.3 主要培養(yǎng)基及試劑配制
        3.1.4 試驗(yàn)動(dòng)物
        3.1.5 PCR引物
    3.2 方法
        3.2.1 細(xì)菌培養(yǎng)與分子生物學(xué)基本操作
        3.2.2 腸外致病性大腸桿菌Hcp1多克隆抗體的制備
        3.2.3 腸外致病性大腸桿菌分泌蛋白的提取及Hcp1蛋白的鑒定
        3.2.4 腸外致病性大腸桿菌缺失突變株P(guān)CN033Δhcp3的構(gòu)建
        3.2.5 腸外致病性大腸桿菌缺失突變株P(guān)CN033Δhcp3生長(zhǎng)曲線的繪制
        3.2.6 腸外致病性大腸桿菌缺失突變株P(guān)CN033Δhcp3肺泡巨噬細(xì)胞吞噬存活試驗(yàn)
        3.2.7 腸外致病性大腸桿菌缺失突變株P(guān)CN033Δhcp3對(duì)PK15細(xì)胞粘附與入侵試驗(yàn)
        3.2.8 腸外致病性大腸桿菌缺失突變株P(guān)CN033Δhcp3對(duì)小鼠的毒力試驗(yàn)
4 結(jié)果與分析
    4.1 腸外致病性大腸桿菌T6SS基因序列分析
    4.2 腸外致病性大腸桿菌Hcp1多克隆抗體的制備
        4.2.1 hcp1基因的克隆
        4.2.2 原核表達(dá)質(zhì)粒pET30a-hcp1的鑒定
        4.2.3 Hcp1蛋白原核表達(dá)與純化的鑒定
        4.2.4 Hcp1多克隆抗體的鑒定
    4.3 腸外致病性大腸桿菌分泌蛋白中Hcp1蛋白的鑒定
    4.4 腸外致病性大腸桿菌缺失突變株P(guān)CN033Δhcp3的構(gòu)建
    4.5 腸外致病性大腸桿菌缺失突變株P(guān)CN033Δhcp3生長(zhǎng)曲線
    4.6 腸外致病性大腸桿菌缺失突變株P(guān)CN033Δhcp3的抗吞噬能力
    4.7 腸外致病性大腸桿菌缺失突變株P(guān)CN033Δhcp3對(duì)上皮細(xì)胞粘附與入侵的能力
    4.8 腸外致病性大腸桿菌缺失突變株P(guān)CN033Δhcp3對(duì)小鼠的毒力
5 討論
6 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄-個(gè)人簡(jiǎn)歷
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]細(xì)菌蛋白分泌途徑的研究進(jìn)展[J]. 訾禎禎,楊志偉.  生物技術(shù)通報(bào). 2011(08)
[2]細(xì)菌Ⅵ型分泌系統(tǒng)的研究進(jìn)展[J]. 李俊,俞盈,王豪舉.  微生物學(xué)報(bào). 2011(03)
[3]豬高熱綜合征的發(fā)生與流行概況[J]. 楊漢春.  豬業(yè)科學(xué). 2007(01)
[4]我國(guó)南方豬高熱病的研究（Ⅰ）——大腸桿菌的分離、鑒定和致病性測(cè)定[J]. 寧宜寶,鄭杰,張純萍,宋立,劉惠文,王琴,丘惠深,丘伯根,趙啟祖,沈青春,劉業(yè)兵,范學(xué)政,徐璐,江煥賢.  中國(guó)獸藥雜志. 2006(12)
[5]非經(jīng)典的蛋白質(zhì)分泌途徑[J]. 劉剛,王清明,陳惠鵬.  生物技術(shù)通訊. 2005(01)



本文編號(hào)：3055015