表沒食子兒茶素沒食子酸酯（Epi-gallocatechin-3-gallate,EGCG）,是茶多酚中主要的生物活性成分,具有抗氧化、抗炎、抑菌、清除體內(nèi)自由基、降血脂、降血壓和降血糖、預(yù)防心腦血管疾病等作用。高脂血癥是目前寵物犬常見的營養(yǎng)代謝性疾病之一,給犬的健康帶來巨大的威脅。本試驗(yàn)通過體外培養(yǎng)犬肝細(xì)胞,添加不同濃度的EGCG作用于犬肝細(xì)胞后,研究EGCG對AMPKα信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中相關(guān)蛋白和基因表達(dá)的影響,初步闡明EGCG降低犬肝細(xì)胞脂合成,增加脂氧化的作用機(jī)制。選取健康幼犬,通過兩步灌流法分離培養(yǎng)犬原代肝細(xì)胞,添加不同濃度的EGCG（0、0.01、0.1和1.0μM EGCG）,作用不同時(shí)間后,確定EGCG最佳添加濃度和作用時(shí)間。犬原代肝細(xì)胞培養(yǎng)48 h后,添加不同濃度的EGCG和AMPKα的抑制劑BML-275（0、0.01、0.1及1.0μM EGCG、10μM BML-275、0.1μM EGCG+10μM BML-275）作用于犬肝細(xì)胞。運(yùn)用倒置顯微鏡和透射電鏡觀察犬肝細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化;采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）檢測PPARα、SREBP-1c、ACO、C... 

【文章來源】：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

EGCG的基礎(chǔ)結(jié)構(gòu)

2 結(jié)果與分析2.1 犬原代肝細(xì)胞分離培養(yǎng)結(jié)果2.1.1 犬原代肝細(xì)胞分離培養(yǎng)過程本研究采用兩步膠原酶灌流法分離培養(yǎng)犬原代肝細(xì)胞。具體步驟如圖 2-1 所示，具體步驟陳述參照材料方法。通過細(xì)胞計(jì)數(shù)，將細(xì)胞密度調(diào)整為 2×106cells/mL，以胎盤藍(lán)拒染試驗(yàn)檢測犬肝細(xì)胞存活率為 85%-90%左右，在條件為37 ℃、5% CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

2.1.2 原代肝細(xì)胞生長狀態(tài)觀察如圖 2-2 所示，倒置顯微鏡下觀察肝細(xì)胞從接種到貼壁生長的具體變化，4 h后換生長培養(yǎng)基，接種 24 h 后，肝細(xì)胞貼壁生長，細(xì)胞邊緣呈圓球形或者多邊形，細(xì)胞貼附于細(xì)胞板上(圖 2C)；培養(yǎng) 48 h 后，細(xì)胞貼壁牢固，長出偽足，呈多邊形，胞漿內(nèi)容物含有豐富的糖原，細(xì)胞排布均勻，細(xì)胞間隙明顯，細(xì)胞生長狀態(tài)良好(圖 2D)。細(xì)胞從 4-192 h，本試驗(yàn)多次培養(yǎng)結(jié)果得知肝細(xì)胞在培養(yǎng) 48 h后細(xì)胞活性最好，用于后續(xù)添加刺激因子試驗(yàn)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]AMP激活的蛋白質(zhì)激酶（AMPK）調(diào)控機(jī)制的研究[D]. 陳雷.清華大學(xué) 2010

碩士論文
[1]EGCG減脂作用及其機(jī)理研究[D]. 李芳.吉林大學(xué) 2017
[2]有氧運(yùn)動(dòng)對增齡大鼠骨骼肌AMPK通路的影響及其作用機(jī)制[D]. 朱文.湖南師范大學(xué) 2015
[3]蟲草素調(diào)血脂作用與上調(diào)AMPK蛋白表達(dá)作用機(jī)制研究[D]. 蘇巖.哈爾濱商業(yè)大學(xué) 2013
[4]表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG）對小鼠卵母細(xì)胞體外成熟，受精及胚胎發(fā)育的影響[D]. 谷亞輕.揚(yáng)州大學(xué) 2008



本文編號：3052870