豬細小病毒1型（Porcine parvovirus 1, PPV1）可導致母豬繁殖功能性障礙,給全球的養(yǎng)豬業(yè)帶來了巨大的經濟損失。近年來國內外陸續(xù)報道出多種新型的豬細小病毒,其中包括豬細小病毒2型（Porcine parvovirus 2, PPV2）、豬細小病毒3型（Porcine parvovirus 3, PPV3）、豬細小病毒4型（Porcine parvovirus 4, PPV4）、豬類博卡病毒（Porcine boca-like virus, PBo-likeV）和豬博卡病毒（Porcine bocavirus, PBoV）等。本研究同時對上述五種新型豬細小病毒在國內的流行概況和變異程度進行了調研,豐富了其分子流行病學參考資料；利用大腸桿菌表達系統(tǒng)和昆蟲桿狀病毒系統(tǒng)同時表達了PPV3VP2完整蛋白和截短蛋白以研究其免疫原性,為PPV3亞單位疫苗的研發(fā)奠定了理論基礎：利用PPV3重組VP2蛋白pET-28a-540建立了間接ELISA方法,為PPV3的檢測提供了血清學檢測手段。具體研究內容如下：1.新型豬細小病毒的分子流行病學調查本研究對2008～2013年期間的308份... 

【文章來源】：南京農業(yè)大學江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數】：113 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 豬細小病毒的研究進展
    （一） 豬細小病毒1型
        1 PPV1病原學特性
            1.1 病毒分類
            1.2 病毒形態(tài)與理化特性
            1.3 PPV1分子生物學研究進展
            1.4 抗原性
            1.5 PPV1致病性與組織嗜性
            1.6 PPV1體外培養(yǎng)特性
            1.7 PPV1流行病學特性
        2 PPV1診斷方法
            2.1 病毒分離
            2.2 血凝（HA）和血凝抑制（HI）試驗
            2.3 中和試驗（SN）
            2.4 酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）
            2.5 乳膠凝集試驗（LAT）
            2.6 膠體金標記技術（SECGA）
            2.7 聚合酶鏈式反應檢測技術（PCR）
            2.8 核酸探針技術
            2.9 免疫熒光技術（IFA）
        3 PPV1疫苗研究
            3.1 弱毒疫苗
            3.2 滅活疫苗
            3.3 基因工程疫苗
    （二） 豬細小病毒2型
    （三） 豬細小病毒3型
    （四） 豬細小病毒4型
    （五） 豬類博卡病毒
    （六） 豬博卡病毒
    參考文獻
第二章 新型豬細小病毒的分子流行病學調查
    摘要
    1 材料與方法
        1.1 材料
            1.1.1 病料
            1.1.2 試劑
        1.2 方法
            1.2.1 DNA的提取
            1.2.2 PCR檢測
            1.2.3 序列測定
    2 結果
        2.1 PCR結果
            2.1.1 PPV2感染情況
            2.1.2 PPV3感染情況
            2.1.3 PPV4感染情況
            2.1.4 PBo-likeV感染情況
            2.1.5 PBoV感染情況
        2.2 測序結果
            2.2.1 PPV2變異程度
            2.2.2 PPV3變異程度
            2.2.3 PPV4變異程度
            2.2.4 PBo-likeV變異程度
            2.2.5 PBoV變異程度
    3 討論
    參考文獻
    ABSTRACT
第三章 豬細小病毒3型VP2蛋白的原核表達與免疫特性研究
    摘要
    1 材料與方法
        1.1 材料
            1.1.1 實驗動物
            1.1.2 主要試劑
        1.2 方法
            1.2.1 重組質粒的構建
            1.2.2 重組質粒的鑒定
            1.2.3 重組質粒的轉化
            1.2.4 重組蛋白的表達
            1.2.5 重組蛋白的純化
            1.2.6 小鼠免疫試驗
    2 試驗結果
        2.1 重組質粒的鑒定
            2.1.1 目的基因的擴增
            2.1.2 重組質粒的PCR鑒定
            2.1.3 重組質粒的酶切鑒定
        2.2 重組蛋白的表達
            2.2.1 重組蛋白的表達鑒定
            2.2.2 重組蛋白表達條件的優(yōu)化
        2.3 重組蛋白的純化
        2.4 抗體效價測定
    3 討論
    參考文獻
    ABSTRACT
第四章 豬細小病毒3型VP2蛋白的真核表達與免疫特性研究
    摘要
    1 材料與方法
        1.1 材料
            1.1.1 實驗動物
            1.1.2 主要試劑
        1.2 方法
            1.2.1 重組質粒的構建
            1.2.2 重組質粒的鑒定
            1.2.3 重組Bacmid的構建與鑒定
            1.2.4 重組桿狀病毒的獲得與擴增
            1.2.5 重組蛋白在Sf9細胞中的表達和鑒定
            1.2.6 重組蛋白的純化
            1.2.7 免疫特性的研究
    2 試驗結果
        2.1 重組質粒的鑒定
            2.1.1 重組質粒的PCR鑒定
            2.1.2 重組質粒的酶切鑒定
        2.2 重組Bacmid的PCR鑒定
        2.3 重組蛋白的表達與鑒定
        2.4 重組蛋白的純化
        2.5 真核蛋白免疫原性的研究
            2.5.1 抗體效價的測定
            2.5.2 細胞因子濃度的測定
    3 討論
    參考文獻
    ABSTRACT
第五章 豬細小病毒3型間接ELISA抗體檢測方法的建立和應用
    摘要
    1 材料與方法
        1.1 材料
            1.1.1 抗原與抗體
            1.1.2 試劑與儀器
        1.2 間接ELISA方法的建立及條件優(yōu)化
            1.2.1 標準陰陽性血清的篩選
            1.2.2 抗原最佳包被濃度和血清最佳稀釋度的篩選
            1.2.3 最佳抗原包被條件的篩選
            1.2.4 最佳封閉液的篩選
            1.2.5 最佳封閉條件的篩選
            1.2.6 最佳一抗作用條件的篩選
            1.2.7 二抗最佳作用濃度的篩選
            1.2.8 二抗最佳作用條件的篩選
            1.2.9 最佳底物顯色條件的篩選
            1.2.10 臨界值的確定
        1.3 特異性試驗
        1.4 重復性試驗
            1.4.1 批內重復性試驗
            1.4.2 批間重復性試驗
        1.5 臨床樣品的檢測
    2 結果
        2.1 間接ELISA最佳反應條件的確定
            2.1.1 最佳抗原包被濃度和待檢血清最佳稀釋度的確定
            2.1.2 抗原最佳包被條件的確定
            2.1.3 最佳封閉液的確定
            2.1.4 最佳封閉條件的確定
            2.1.5 最佳血清作用條件的確定
            2.1.6 HRP-SPA最佳稀釋度的確定
            2.1.7 HRP-SPA最佳反應條件的確定
            2.1.8 TMB最佳顯色條件的確定
            2.1.9 臨界值的確定
        2.2 特異性試驗
        2.3 重復性試驗
            2.3.1 批內重復性試驗
            2.3.2 批間重復性試驗
        2.4 臨床血清樣品的檢測
    3 討論
    參考文獻
    ABSTRACT
全文總結
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]新型豬細小病毒感染的分子流行病學調查[J]. 崔鵬超,何玉,劉捷,李玉峰,姜平,王先煒.  畜牧與獸醫(yī). 2014(04)
[2]豬博卡病毒PCR檢測方法的建立及其初步流行病學調查[J]. 胡軍勇,張倩,王丹丹,涂志勤,胡睿銘,湯細彪,吳斌.  中國預防獸醫(yī)學報. 2012(08)
[3]牛副流感病毒3型HN基因原核表達及間接ELISA方法建立[J]. 周玉龍,任亞超,朱戰(zhàn)波,侯喜林,王密,耿晶,樸范澤,李森.  病毒學報. 2012(01)
[4]豬支原體重組MSG1蛋白間接ELISA檢測方法的建立[J]. 張長瑩,李玉峰,華榮蓉,劉捷,姜平.  畜牧與獸醫(yī). 2011(02)
[5]豬博卡病毒PCR檢測方法的建立及其應用[J]. 翟少倫,岳城,韋祖樟,冉多良,龍進學,藺濤,鄧宇,孫利廠,黃律,袁世山.  中國動物傳染病學報. 2010(02)
[6]間接ELISA檢測犬細小病毒病血清抗體方法的建立[J]. 劉劍郁,李曉成,陳德坤,張燕霞,陳杰,吳發(fā)興.  中國動物檢疫. 2006(03)
[7]豬細小病毒SC-1株VP2基因的克隆及生物信息學分析[J]. 羅燕,郭萬柱,劉艷麗,殷華平.  動物醫(yī)學進展. 2005(08)
[8]Baculovirus as a highly efficient expression vector in insect and mammalian cells[J]. Yu-chen HU~1 Department of Chemical Engineering,National Tsing Hua University,Hsinchu,Taiwan,China.  Acta Pharmacologica Sinica. 2005(04)
[9]豬細小病毒PCR檢測方法的建立與應用[J]. 趙俊龍,陳煥春,呂建強,邱德新,周復春.  中國獸醫(yī)學報. 2003(02)
[10]豬細小病毒VP2蛋白在昆蟲細胞中的表達及其特性[J]. 呂建強,陳煥春,趙俊龍,肖少波,王革非.  微生物學報. 2002(06)

博士論文
[1]豬細小病毒非結構蛋白NS1和結構蛋白VP2的研究[D]. 卿柳庭.華中農業(yè)大學 2005
[2]豬細小病毒基因組序列測定及結構蛋白基因的克隆、表達與基因免疫研究[D]. 趙俊龍.華中農業(yè)大學 2001



本文編號：3052717