日本血吸蟲(chóng)是流行于東南亞的熱帶或亞熱帶地區(qū)及我國(guó)南方的人畜共患寄生蟲(chóng)。它能感染豬、牛、羊、狗、嚙齒動(dòng)物等多種哺乳動(dòng)物和人,引起日本血吸蟲(chóng)病；因此我國(guó)對(duì)日本血吸蟲(chóng)病的防制投入了大量的人力和財(cái)力。50年的抗血吸蟲(chóng)病戰(zhàn)役使我們獲得了日本血吸蟲(chóng)病防制的三條經(jīng)驗(yàn)：化學(xué)藥物療法、滅螺和防治宣傳教育。不同的綜合防制策略有效地抑制了日本血吸蟲(chóng)病在我國(guó)的發(fā)病率；但是這并不能根除日本血吸蟲(chóng)病在我國(guó)的流行。迄今為止,仍沒(méi)有疫苗可用于防控日本血吸蟲(chóng)��；而抗吡喹酮血吸蟲(chóng)株的出現(xiàn)對(duì)我們僅依賴一種藥物來(lái)防治該病提出了警示,說(shuō)明急需開(kāi)發(fā)新的藥物和疫苗。蛋白激酶調(diào)控生物體內(nèi)包括DNA復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、翻譯、細(xì)胞周期進(jìn)程等一系列細(xì)胞過(guò)程,許多蛋白激酶也是極其重要的藥物靶標(biāo)。根據(jù)結(jié)構(gòu)差異,蛋白激酶分為真核蛋白激酶（ePKs）和非典型蛋白激酶（aPKs）。非典型蛋白激酶包括13個(gè)家族,RIO激酶是非典型蛋白激酶家族的一員。RIO激酶是ATP依賴的絲氨酸蛋白激酶,由Rio1、Rio2和Rio3三個(gè)成員構(gòu)成。Rio1和Rio2存在于從古菌到人的各種生物體內(nèi),而Rio3僅存在于多細(xì)胞真核生物體內(nèi)。古菌Rio1和Rio2的晶體結(jié)構(gòu)分析發(fā)現(xiàn)... 

【文章來(lái)源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：85 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
目錄
摘要
ABSTRACT
縮略語(yǔ)表
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 日本血吸蟲(chóng)
        1.1.1 日本血吸蟲(chóng)概述
        1.1.2 日本血吸蟲(chóng)的生活史
        1.1.3 日本血吸蟲(chóng)的致病性及危害
        1.1.4 日本血吸蟲(chóng)病的診斷與防治
        1.1.5 日本血吸蟲(chóng)的基因組
    1.2 RIO蛋白激酶
        1.2.1 RIO蛋白激酶概述
        1.2.2 RIO激酶的一級(jí)結(jié)構(gòu)特征
        1.2.3 RIO激酶的空間結(jié)構(gòu)
        1.2.4 RIO激酶家族的功能
2 研究的目的與意義
3 材料與方法
    3.1 試驗(yàn)材料
        3.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物
        3.1.2 菌種與質(zhì)粒
        3.1.3 主要試劑和酶
        3.1.4 溶液的配制
        3.1.5 主要儀器與設(shè)備
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 日本血吸蟲(chóng)成蟲(chóng)的收集
        3.2.2 引物的設(shè)計(jì)與合成
        3.2.3 日本血吸蟲(chóng)總RNA的提取
        3.2.4 3'-RACE第一鏈反應(yīng)物的合成
        3.2.5 3'-RACE擴(kuò)增Sj-Rio1和Sj-Rio2基因3’末端序列
        3.2.6 瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA片段大小
        3.2.7 PCR產(chǎn)物的純化回收
        3.2.8 目的DNA連接pMD19-T載體
2法制備大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞">        3.2.9 CaCl₂法制備大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞
        3.2.10 連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化DH5a感受態(tài)細(xì)胞
        3.2.11 菌液PCR鑒定
        3.2.12 PCR擴(kuò)增日本血吸蟲(chóng)Rio1基因的ORF片段
        3.2.13 PCR擴(kuò)增日本血吸蟲(chóng)Rio2基因的ORF片段
        3.2.14 質(zhì)粒DNA的小量提取和鑒定
        3.2.15 Northern雜交
        3.2.16 質(zhì)粒DNA的雙酶切
        3.2.17 原核表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.2.18 原核表達(dá)載體的鑒定
        3.2.19 重組質(zhì)粒原核表達(dá)條件的優(yōu)化
        3.2.20 重組質(zhì)粒大量表達(dá)靶蛋白
        3.2.21 日本血吸蟲(chóng)Rio1和Rio2截短蛋白的原核表達(dá)
        3.2.22 GST融合蛋白的純化
        3.2.23 His融合蛋白的純化
        3.2.24 蛋白質(zhì)的SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳
        3.2.25 日本血吸蟲(chóng)Riol和Rio2蛋白多克隆抗體的制備
        3.2.26 ELISA測(cè)定多抗血清效價(jià)
        3.2.27 Western blot
        3.2.28 日本血吸蟲(chóng)組織蛋白提取
        3.2.29 Western blot檢測(cè)制備多克隆抗體的免疫反應(yīng)活性
4 結(jié)果與分析
    4.1 日本血吸蟲(chóng)Rio1和Rio2基因cDNA全長(zhǎng)序列的獲得
        4.1.1 日本血吸蟲(chóng)總RNA提取
        4.1.2 3'-RACE擴(kuò)增日本血吸蟲(chóng)Rio1和Rio2的3’端DNA片段
        4.1.3 PCR擴(kuò)增日本血吸蟲(chóng)Rio1和Rio2 ORF片段
    4.2 日本血吸蟲(chóng)Rio1和Rio2生物信息學(xué)分析
        4.2.1 日本血吸蟲(chóng)Rio1和Rio2基因結(jié)構(gòu)分析
        4.2.2 日本血吸蟲(chóng)Rio1和Rio2分子進(jìn)化分析
        4.2.3 日本血吸蟲(chóng)Rio1和Rio2保守結(jié)構(gòu)域分析
        4.2.4 日本血吸蟲(chóng)Rio1和Rio2蛋白性質(zhì)預(yù)測(cè)
    4.3 日本血吸蟲(chóng)Rio1和Rio2的mRNA Northern雜交
    4.4 日本血吸蟲(chóng)Rio1和Rio2 ORF全長(zhǎng)的原核表達(dá)
        4.4.1 重組日本血吸蟲(chóng)Rio1蛋白的原核表達(dá)
        4.4.2 重組日本血吸蟲(chóng)Rio2蛋白的原核表達(dá)
    4.5 日本血吸蟲(chóng)Rio1和Rio2截短序列的原核表達(dá)
        4.5.1 日本血吸蟲(chóng)Rio1和Rio2截短序列的原核表達(dá)載體構(gòu)建
        4.5.2 日本血吸蟲(chóng)Rio1和Rio2重組截短蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
        4.5.3 重組日本血吸蟲(chóng)Rio1和Rio2截短蛋白的純化
    4.6 多克隆抗體的制備
        4.6.1 抗日本血吸蟲(chóng)Rio1和Rio2多克隆抗血清的效價(jià)測(cè)定
        4.6.2 抗日本血吸蟲(chóng)Rio1和Rio2多克隆抗體的免疫反應(yīng)性
    4.7 Western blot確定日本血吸蟲(chóng)組織中Rio1或Rio2蛋白
        4.7.1 重組GST-Rio1或GST-Rio2蛋白的Western blot
        4.7.2 日本血吸蟲(chóng)總蛋白SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳
        4.7.3 日本血吸蟲(chóng)體內(nèi)Rio1和Rio2蛋白的Western blot
5 討論
    5.1 日本血吸蟲(chóng)Rio1和Rio2基因生物信息學(xué)分析
    5.2 日本血吸蟲(chóng)Rio1和Rio2的Northern雜交
    5.3 日本血吸蟲(chóng)Rio1和Rio2的蛋白表達(dá)
    5.4 日本血吸蟲(chóng)Rio1和Rio2的多克隆抗體及應(yīng)用
6 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝



本文編號(hào)：3052224