檢測豬肺表面活性蛋白A/D基因?qū)崟r熒光定量和納米PCR方法的建立
發(fā)布時間：2021-02-23 07:41
表面活性蛋白A（surfactant proteins，SP-A）和表面活性蛋白D（surfactant proteins，SP-D）對肺部的發(fā)育、成熟起到重要作用。SP-A和SP-D基因的表達(dá)量與呼吸系統(tǒng)免疫防御息息相關(guān)，對肺部的異常病變具有指示作用，所以可以作為多種肺部疾病的生物標(biāo)記。為檢測體內(nèi)SP-A/SP-D基因，本研究建立了兩種檢測方法：即熒光定量PCR方法和納米金PCR方法，并且驗(yàn)證這兩種方法的特異性及靈敏性。根據(jù)豬SP-A基因序列（NM214265.1）和豬SP-D基因序列（NM214110）設(shè)計(jì)特異性引物，將SP-A的CDS區(qū)（750bp）和SP-D的CDS區(qū)（1137bp）分別鏈接至PMD-18T載體，構(gòu)建了豬SP-A基因和SP-D基因CDS區(qū)全序列重組質(zhì)粒PMD-SP-A和PMD-SP-D。設(shè)計(jì)并合成了特異性的引物和探針，以重組質(zhì)粒為標(biāo)準(zhǔn)品，對探針、引物等濃度及退火溫度進(jìn)行優(yōu)化，建立了豬SP-A/SP-D基因的TaqMan熒光定量PCR方法。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：所建立熒光定量PCR檢測方法為異性擴(kuò)增；SP-A基因檢測下限達(dá)到2....
【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校
【文章頁數(shù)】：40 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
SP-A肽鏈結(jié)構(gòu)
1.3.1 SP-A/SP-D 基因的生物學(xué)特性SP-A 肽鏈?zhǔn)怯?248 個氨基酸組成的，共 750bp，分子量約為 28-36kDa[6]。SP-A 每鏈都有四個基本結(jié)構(gòu)[20]（圖 1.1）：一個短的含有半胱氨酸殘基的 N 端；膠原樣區(qū)（CL莖區(qū)；球狀結(jié)構(gòu)的 C 型糖識別區(qū)（CRD）。CLR 區(qū)能使三條肽鏈螺旋鏈接在一起，莖區(qū)著球狀的 CRD 區(qū)，構(gòu)成了由三條肽鏈組成的三聚體結(jié)構(gòu)（圖 1.2）。而 SP-A 蛋白是由六樣的三聚體，在 N-端通過半胱氨酸殘基鏈接而成的一束（圖 1.3）。SP-A 的 CLR 區(qū)高度保決定著蛋白的三聚體結(jié)構(gòu)，CRD 區(qū)有糖的識別位點(diǎn)，在 Ca2+的存在下，CRD 區(qū)能夠與合，這一特性是 SP-A 能夠結(jié)合外源微生物促進(jìn)免疫反應(yīng)的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。SP-A 的 CLR 和 都屬于 C 型膠原凝集素[21]，CRD 在 Ca2+依賴的情況下結(jié)合糖基，同時 CLR 結(jié)合受體，參與呼吸系統(tǒng)的免疫防御反應(yīng)，而不需要中央免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)。圖 1.1 SP-A 肽鏈結(jié)構(gòu)Fig1.1 The Peptide chain structure of SP-A
1.3.1 SP-A/SP-D 基因的生物學(xué)特性SP-A 肽鏈?zhǔn)怯?248 個氨基酸組成的，共 750bp，分子量約為 28-36kDa[6]。SP-A 每鏈都有四個基本結(jié)構(gòu)[20]（圖 1.1）：一個短的含有半胱氨酸殘基的 N 端；膠原樣區(qū)（CL莖區(qū)；球狀結(jié)構(gòu)的 C 型糖識別區(qū)（CRD）。CLR 區(qū)能使三條肽鏈螺旋鏈接在一起，莖區(qū)著球狀的 CRD 區(qū)，構(gòu)成了由三條肽鏈組成的三聚體結(jié)構(gòu)（圖 1.2）。而 SP-A 蛋白是由六樣的三聚體，在 N-端通過半胱氨酸殘基鏈接而成的一束（圖 1.3）。SP-A 的 CLR 區(qū)高度保決定著蛋白的三聚體結(jié)構(gòu)，CRD 區(qū)有糖的識別位點(diǎn)，在 Ca2+的存在下，CRD 區(qū)能夠與合，這一特性是 SP-A 能夠結(jié)合外源微生物促進(jìn)免疫反應(yīng)的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。SP-A 的 CLR 和 都屬于 C 型膠原凝集素[21]，CRD 在 Ca2+依賴的情況下結(jié)合糖基，同時 CLR 結(jié)合受體，參與呼吸系統(tǒng)的免疫防御反應(yīng)，而不需要中央免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)。圖 1.1 SP-A 肽鏈結(jié)構(gòu)Fig1.1 The Peptide chain structure of SP-A
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]北京城區(qū)可吸入顆粒物分布與呼吸系統(tǒng)疾病相關(guān)分析[J]. 楊維,趙文吉,宮兆寧,趙文慧,唐濤. 環(huán)境科學(xué). 2013(01)
[2]豬常見呼吸道疾病的鑒別診斷及防治[J]. 徐博文,代軍,張陽,楊啟帆,劉丹,舒蕾. 山東畜牧獸醫(yī). 2012(08)
[3]豬呼吸系統(tǒng)疾病特點(diǎn)及防治[J]. 黃丹. 福建農(nóng)業(yè). 2012(08)
[4]納米PCR技術(shù)檢測溶藻弧菌的建立與初步應(yīng)用[J]. 劉陽,孔繁德,彭小莉,徐淑菲,吳德峰,林立. 中國動物檢疫. 2012(03)
[5]西安市雁塔區(qū)冬季可吸入顆粒物時空變化研究[J]. 穆珍珍,趙景波,徐娜,姚蘭,李雨霞,孟靜靜. 環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào). 2011(07)
[6]肺表面活性蛋白D的研究進(jìn)展[J]. 衛(wèi)闊,宋興磊,閆亞敏. 國際病理科學(xué)與臨床雜志. 2011(03)
[7]納米銀對PCR體系中DNA合成的影響及其機(jī)理研究[J]. 劉鵬鵬,關(guān)榮發(fā),劉明啟,黃光榮,戴賢君. 農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2010(05)
[8]豬SP-A基因熒光定量PCR檢測方法的建立[J]. 喬莉娟,王立賢,顏華. 動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2009(08)
[9]納米金增強(qiáng)復(fù)雜體系中PCR擴(kuò)增低拷貝基因的反應(yīng)特異性初步研究[J]. 李海闊,曹雪雁,周智磊,陳恒. 中國生物工程雜志. 2009(08)
[10]肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A的研究進(jìn)展[J]. 晉大鵬,王立賢,張龍超,陳書明,胡志帥. 中國畜牧獸醫(yī). 2009(04)
博士論文
[1]豬肺免疫防御相關(guān)基因—肺表面活性蛋白A的研究[D]. 喬莉娟.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2008
碩士論文
[1]豬細(xì)小病毒感染ST細(xì)胞對I型干擾素產(chǎn)生的影響[D]. 藺文成.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2012
[2]榮昌豬肺表面活性蛋白A分子生物學(xué)研究[D]. 劉欣.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2010
[3]肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A1在大腸桿菌及酵母中的表達(dá)與純化[D]. 蘭和魁.第一軍醫(yī)大學(xué) 2000
本文編號：3047242
【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校
【文章頁數(shù)】：40 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
SP-A肽鏈結(jié)構(gòu)
1.3.1 SP-A/SP-D 基因的生物學(xué)特性SP-A 肽鏈?zhǔn)怯?248 個氨基酸組成的，共 750bp，分子量約為 28-36kDa[6]。SP-A 每鏈都有四個基本結(jié)構(gòu)[20]（圖 1.1）：一個短的含有半胱氨酸殘基的 N 端；膠原樣區(qū)（CL莖區(qū)；球狀結(jié)構(gòu)的 C 型糖識別區(qū)（CRD）。CLR 區(qū)能使三條肽鏈螺旋鏈接在一起，莖區(qū)著球狀的 CRD 區(qū)，構(gòu)成了由三條肽鏈組成的三聚體結(jié)構(gòu)（圖 1.2）。而 SP-A 蛋白是由六樣的三聚體，在 N-端通過半胱氨酸殘基鏈接而成的一束（圖 1.3）。SP-A 的 CLR 區(qū)高度保決定著蛋白的三聚體結(jié)構(gòu)，CRD 區(qū)有糖的識別位點(diǎn)，在 Ca2+的存在下，CRD 區(qū)能夠與合，這一特性是 SP-A 能夠結(jié)合外源微生物促進(jìn)免疫反應(yīng)的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。SP-A 的 CLR 和 都屬于 C 型膠原凝集素[21]，CRD 在 Ca2+依賴的情況下結(jié)合糖基，同時 CLR 結(jié)合受體，參與呼吸系統(tǒng)的免疫防御反應(yīng)，而不需要中央免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)。圖 1.1 SP-A 肽鏈結(jié)構(gòu)Fig1.1 The Peptide chain structure of SP-A
1.3.1 SP-A/SP-D 基因的生物學(xué)特性SP-A 肽鏈?zhǔn)怯?248 個氨基酸組成的，共 750bp，分子量約為 28-36kDa[6]。SP-A 每鏈都有四個基本結(jié)構(gòu)[20]（圖 1.1）：一個短的含有半胱氨酸殘基的 N 端；膠原樣區(qū)（CL莖區(qū)；球狀結(jié)構(gòu)的 C 型糖識別區(qū)（CRD）。CLR 區(qū)能使三條肽鏈螺旋鏈接在一起，莖區(qū)著球狀的 CRD 區(qū)，構(gòu)成了由三條肽鏈組成的三聚體結(jié)構(gòu)（圖 1.2）。而 SP-A 蛋白是由六樣的三聚體，在 N-端通過半胱氨酸殘基鏈接而成的一束（圖 1.3）。SP-A 的 CLR 區(qū)高度保決定著蛋白的三聚體結(jié)構(gòu)，CRD 區(qū)有糖的識別位點(diǎn)，在 Ca2+的存在下，CRD 區(qū)能夠與合，這一特性是 SP-A 能夠結(jié)合外源微生物促進(jìn)免疫反應(yīng)的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。SP-A 的 CLR 和 都屬于 C 型膠原凝集素[21]，CRD 在 Ca2+依賴的情況下結(jié)合糖基，同時 CLR 結(jié)合受體，參與呼吸系統(tǒng)的免疫防御反應(yīng)，而不需要中央免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)。圖 1.1 SP-A 肽鏈結(jié)構(gòu)Fig1.1 The Peptide chain structure of SP-A
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]北京城區(qū)可吸入顆粒物分布與呼吸系統(tǒng)疾病相關(guān)分析[J]. 楊維,趙文吉,宮兆寧,趙文慧,唐濤. 環(huán)境科學(xué). 2013(01)
[2]豬常見呼吸道疾病的鑒別診斷及防治[J]. 徐博文,代軍,張陽,楊啟帆,劉丹,舒蕾. 山東畜牧獸醫(yī). 2012(08)
[3]豬呼吸系統(tǒng)疾病特點(diǎn)及防治[J]. 黃丹. 福建農(nóng)業(yè). 2012(08)
[4]納米PCR技術(shù)檢測溶藻弧菌的建立與初步應(yīng)用[J]. 劉陽,孔繁德,彭小莉,徐淑菲,吳德峰,林立. 中國動物檢疫. 2012(03)
[5]西安市雁塔區(qū)冬季可吸入顆粒物時空變化研究[J]. 穆珍珍,趙景波,徐娜,姚蘭,李雨霞,孟靜靜. 環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào). 2011(07)
[6]肺表面活性蛋白D的研究進(jìn)展[J]. 衛(wèi)闊,宋興磊,閆亞敏. 國際病理科學(xué)與臨床雜志. 2011(03)
[7]納米銀對PCR體系中DNA合成的影響及其機(jī)理研究[J]. 劉鵬鵬,關(guān)榮發(fā),劉明啟,黃光榮,戴賢君. 農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2010(05)
[8]豬SP-A基因熒光定量PCR檢測方法的建立[J]. 喬莉娟,王立賢,顏華. 動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2009(08)
[9]納米金增強(qiáng)復(fù)雜體系中PCR擴(kuò)增低拷貝基因的反應(yīng)特異性初步研究[J]. 李海闊,曹雪雁,周智磊,陳恒. 中國生物工程雜志. 2009(08)
[10]肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A的研究進(jìn)展[J]. 晉大鵬,王立賢,張龍超,陳書明,胡志帥. 中國畜牧獸醫(yī). 2009(04)
博士論文
[1]豬肺免疫防御相關(guān)基因—肺表面活性蛋白A的研究[D]. 喬莉娟.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2008
碩士論文
[1]豬細(xì)小病毒感染ST細(xì)胞對I型干擾素產(chǎn)生的影響[D]. 藺文成.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2012
[2]榮昌豬肺表面活性蛋白A分子生物學(xué)研究[D]. 劉欣.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2010
[3]肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A1在大腸桿菌及酵母中的表達(dá)與純化[D]. 蘭和魁.第一軍醫(yī)大學(xué) 2000
本文編號：3047242
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