本課題是應(yīng)用基于雙向電泳的蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)及MALDI TOF/TOF質(zhì)譜檢測(cè)技術(shù)，分析不同禽源的新城疫病毒（NA-1及F48E9株）體外感染原代雞胚成纖維細(xì)胞（CEF）全蛋白變化情況。實(shí)驗(yàn)分為三組比較：比較新城疫病毒NA-1感染細(xì)胞前后全細(xì)胞蛋白；比較新城疫病毒F48E9感染細(xì)胞前后全細(xì)胞蛋白；比較不同NA-1及F48E9新城疫病毒感染細(xì)胞后全細(xì)胞蛋白。通過(guò)比較鑒定差異表達(dá)的蛋白，分析差異蛋白的功能。進(jìn)而選取其中兩種蛋白進(jìn)行功能分析，采用構(gòu)建真核表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞的方法，研究蛋白過(guò)表達(dá)對(duì)細(xì)胞增殖的影響。首先用NA-1株病毒體外感染原代雞胚成纖維細(xì)胞12h、24h、36h觀察細(xì)胞病變及間接免疫熒光試驗(yàn)確定病毒感染細(xì)胞最佳時(shí)期，通過(guò)以上兩種方法，確定病毒感染全細(xì)胞蛋白提取時(shí)間為病毒感染細(xì)胞后24h，在這個(gè)時(shí)期，大部分（90%）細(xì)胞已經(jīng)被病毒感染，但并沒(méi)有死亡，是病毒感染研究的最佳時(shí)間。在確定時(shí)間點(diǎn)后，擴(kuò)大培養(yǎng)細(xì)胞，然后將病毒NA-1及F48E9感染雞胚成纖維細(xì)胞24h，感染結(jié)束后加入全細(xì)胞蛋白提取液提取感染及未感染的雞胚成纖維全細(xì)胞蛋白，離心去除細(xì)胞碎片后，上清液即為粗提蛋白樣品。在雙向電泳... 

【文章來(lái)源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

間接免疫熒光試驗(yàn)檢測(cè)NA-1病毒感染不同時(shí)間，病毒感染細(xì)胞結(jié)果

圖 1.2 蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線Figure 1.2 Protein standard curve同源新城疫病毒感染 CEF 的雙向電泳凝膠圖譜源新城疫 NA-1 株和禽源新城疫 F48E9 株感染雞胚成纖維細(xì)胞 24h 后總蛋白，為了減小誤差，每種樣品感染 3 次，凝膠電泳重復(fù) 3 次。雙8cm pH4-7 IPG 膠條分離 150μg 蛋白，分離后，應(yīng)用與質(zhì)譜兼容的銀色后進(jìn)行圖像掃描及圖像分析，如圖 2.2、2.3、2.4 所示，我們分別（未感染的 CEF 細(xì)胞），569（感染 NA-1 的 CEF 細(xì)胞）和 578（感染 FF 細(xì)胞）左右的點(diǎn)。凝膠經(jīng)掃描后，將圖像輸入軟件，用軟件進(jìn)行蛋比較，差異在 3 倍以上的蛋白點(diǎn)為差異蛋白點(diǎn)，進(jìn)行后續(xù)的分析及感染 NA-1 病毒的 CEF 細(xì)胞（NA）全蛋白與未感染的 CEF 全細(xì)胞ol)的比較有 14 個(gè) 3 倍以上顯著差異點(diǎn)；感染 F48E9 病毒的 CEF 細(xì)胞（

疫、鵝源新城疫感染雞胚成纖維細(xì)胞及未感染的雞胚成胞雙向電泳差異點(diǎn)比較ken Newcastle Disease, goose-origin Newcastle disease infbryo fibroblasts and uninfected chicken embryo fibroblao-dimensional electrophoresis point of difference感染 3 倍以上差異點(diǎn)個(gè)數(shù) 上調(diào) A vs Control 14 3 E vs Control 18 7 NA vs FE 17 4

【參考文獻(xiàn)】：
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博士論文
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本文編號(hào)：3042732