1999年Ghrelin作為一個內(nèi)在生長激素促分泌素受體（Growth hormone secretagogue receptor,GHS-R）的配體被發(fā)現(xiàn),當(dāng) Ghrelin 與GHS-R結(jié)合后可以刺激生長激素（Growth hormone,GH）的分泌。研究表明Ghrelin在生物體內(nèi)除能調(diào)節(jié)GH分泌外還有增加食欲、調(diào)節(jié)能量平衡和促進胃酸分泌等作用。當(dāng)前國內(nèi)外對Ghrelin的研究主要集中在人、嚙齒動物和家畜上,極少有梅花鹿方面的相關(guān)報道,只有本課題組獲得過梅花鹿Ghrelin cDNA的部分序列。為了得到梅花鹿Ghrelin基因cDNA的全長序列,同時檢測Ghrelin在動物體內(nèi)的表達(dá)與分布情況。本試驗利用cDNA末端快速擴增技術(shù)（RACE）、反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）、實時熒光定量PCR（RT-qPCR）及免疫組織化學(xué)等技術(shù)來進行研究。試驗在本課題組已獲取的梅花鹿Ghrelin cDNA部分片段的基礎(chǔ)上進行3’和5’ RACE。結(jié)果成功克隆出了梅花鹿Ghrelin cDNA的3’及5’末端序列,通過與已知序列的拼接首次得到了 539 bp的梅花鹿Ghrelin cD... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語表
1 引言
    1.1 概述
    1.2 Ghrelin的發(fā)現(xiàn)
    1.3 Ghrelin及其受體GHS-R的結(jié)構(gòu)
    1.4 Ghrelin的組織分布
    1.5 Ghrelin的生物學(xué)作用
        1.5.1 Ghrelin對GH分泌的調(diào)控作用
        1.5.2 Ghrelin在增加食欲,調(diào)節(jié)能量平衡方面的作用
        1.5.3 Ghrelin與生殖激素的相互作用
        1.5.4 Ghrelin在卵巢組織中的作用
        1.5.5 Ghrelin對心血管系統(tǒng)功能的影響
        1.5.6 Ghrelin的其他作用
    1.6 Ghrelin的應(yīng)用前景
    1.7 試驗?zāi)康暮鸵饬x
2 材料與方法
    2.1 試驗材料
        2.1.1 試驗動物及其組織
        2.1.2 主要儀器與試劑
    2.2 試驗方法
        2.2.1 引物設(shè)計及合成
        2.2.2 梅花鹿Ghrelin全長cDNA克隆及其序列分析
            2.2.2.1 梅花鹿皺胃黏膜上皮組織總RNA的提取
            2.2.2.2 3' RACE
            2.2.2.3 5' RACE
            2.2.2.4 3' RACE和5' RACE產(chǎn)物的克隆、篩選、鑒定
            2.2.2.5 DNA序列測定
        2.2.3 梅花鹿體內(nèi)各組織總RNA的提取及檢測
        2.2.4 反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)
        2.2.5 PCR反應(yīng)
        2.2.6 RT-qPCR反應(yīng)
        2.2.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
        2.2.8 免疫組織化學(xué)法操作程序
            2.2.8.1 制備組織連續(xù)切片
            2.2.8.2 免疫組織化學(xué)染色
3 試驗結(jié)果
    3.1 梅花鹿Ghrelin全長cDNA克隆及其序列分析
        3.1.1 3' RACE與5' RACE擴增結(jié)果
        3.1.2 梅花鹿Ghrelin cDNA的全序列
        3.1.3 梅花鹿Ghrelin cDNA的全序列的同源性比較
        3.1.4 梅花鹿Ghrelin編碼的氨基酸及其同源性比較
    3.2 梅花鹿Ghrelin在各器官內(nèi)的表達(dá)
        3.2.1 梅花鹿總RNA的檢測
        3.2.2 梅花鹿Ghrelin在各組織器官內(nèi)的定性檢測
            3.2.2.1 目的引物擴增產(chǎn)物檢測
            3.2.2.2 內(nèi)參引物擴增產(chǎn)物檢測
        3.2.3 梅花鹿Ghrelin在各組織器官內(nèi)相對定量檢測
    3.3 梅花鹿Ghrelin在各器官內(nèi)的定位檢測
        3.3.1 梅花鹿Ghrelin在消化管內(nèi)的定位
        3.3.2 梅花鹿Ghrelin在消化腺內(nèi)的分布
        3.3.3 梅花鹿Ghrelin在其他實質(zhì)性器官內(nèi)的分布
4 討論
    4.1 梅花鹿Ghrelin全長cDNA序列分析
    4.2 梅花鹿Ghrelin在各器官內(nèi)的表達(dá)檢測
    4.3 梅花鹿Ghrelin在各器官內(nèi)的定位檢測
5 結(jié)論
致謝
參考文獻
作者簡介


【參考文獻】：
期刊論文
[1]中國馴鹿生長素（ghrelin）全長cDNA的克隆及序列分析[J]. 楊銀鳳,余興邦,王冠玉,都格爾斯仁,包花爾,徐斯日古楞.  中國獸醫(yī)學(xué)報. 2014(10)
[2]Distribution of ghrelin-like immunoreactive cells in amphioxus,Branchiostoma belcheri-A study of immunohistochemistry[J]. You-Zhu Weng,Hai-Xia Song,Yong-Qiang Fang The Third Institute of Oceanography of the State Oceanic Administration,Xiamen 361005,China.  Progress in Natural Science. 2008(02)
[3]Ghrelin在成年皖西白鵝小腸內(nèi)的免疫組化定位研究[J]. 李福寶,方富貴,李梅清,涂健,陶勇,蔣書東,李培英.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報. 2007(02)
[4]豬Ghrelin的基因克隆及其組織中mRNA分布的研究[J]. 楊連玉,楊文艷,冀鳳杰,趙穎彩,賈銳,王哲.  吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2004(01)

博士論文
[1]Ghrelin在烏珠穆沁羊雌性生殖道內(nèi)的表達(dá)及其真核表達(dá)載體的構(gòu)建[D]. 呂東媛.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008



本文編號：3041865