口蹄疫俗稱“口瘡”,主要侵害牛、羊、豬等偶蹄動(dòng)物,引起口、蹄、乳頭等部位會(huì)出現(xiàn)水泡形成糜爛。口蹄疫發(fā)病率高,傳播迅速,制約了畜牧業(yè)的發(fā)展以及動(dòng)物和動(dòng)物產(chǎn)品的國(guó)際貿(mào)易。近年來(lái),口蹄疫A型從東南亞地區(qū)傳入我們東亞國(guó)家,使我國(guó)口蹄疫疫情變得更為嚴(yán)峻,因此,需要一種簡(jiǎn)便、特異的檢測(cè)方法對(duì)該病進(jìn)行診斷和監(jiān)測(cè)。本研究通過(guò)特異性引物擴(kuò)增克隆口蹄疫A型病毒的VP1基因,構(gòu)建表達(dá)質(zhì)粒PET-32a-VP1和pGEX-6p-l-VP1,轉(zhuǎn)入BL21重組菌誘導(dǎo)表達(dá)融合蛋白,可溶性分析主要以包涵體形式存在。融合蛋白分別經(jīng)His和GST柱層析純化,SDS-PAGE分析蛋白電泳純度較高,Western blot檢測(cè)能與口蹄疫A型多克隆抗體特異性結(jié)合,而不與O型和Asial型發(fā)生反應(yīng),表明融合蛋白具有良好的特異性和抗原性。用純化的融合蛋白PET-32a-VPl免疫6周齡的BALB/c雌性小鼠,經(jīng)過(guò)3次免疫后測(cè)定效價(jià)均大于1:12800,可用于細(xì)胞融合。以純化的融合蛋白pGEX-6p-1-VP1作為包被抗原進(jìn)行間接ELISA篩選陽(yáng)性雜交瘤,經(jīng)4次細(xì)胞亞克隆最終篩選出4株穩(wěn)定分泌抗口蹄疫A型VP1蛋白單抗的雜交瘤細(xì)胞株... 

【文章來(lái)源】：廣西大學(xué)廣西壯族自治區(qū) 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：77 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１?口蹄疫病毒基因組示意圖??Ｆｉｇ．?１￣１?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｍａｐ?ｏｆ?ＦＭＤＶ?ｇｅｎｏｍｅ??

重組菌?ＰＥＴ－３２ａ－ＶＰｌ／ＢＬ２１?和?ｐＧＥＸ－６ｐ－ｌ－ＶＰ１／ＢＬ２１?裂解產(chǎn)物進(jìn)行?ＳＤＳ－ＰＡＧＥ?電泳，??用考馬斯亮藍(lán)快速染色劑染色，可見(jiàn)重組菌的裂解產(chǎn)物分別在約４３．?６ＫＤａ和４９．?３ＫＤ的??蛋白條帶（

祖丨一￣＾一?／??圖３－７重組菌ＰＥＴ－３２ａ－ＶＰｌ／ＢＬ２１不同ＩＰＴＧ濃度誘導(dǎo)表達(dá)產(chǎn)物的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析??Ｍ：標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)分子量；１－６：分別為?Ｏ．ｌｍＭ、０．４ｍＭ、０．８ｘｎＭ、１．２ｍＭ、１．６ｍＭ、２．０ｍＭ?的??ＩＰＴＧ?濃度誘導(dǎo)?ＰＥＴ－３２ａ－ＶＰｌ／ＢＬ２１?表達(dá)??Ｆｉｇ．３－７?ＳＤＳ－ＰＡＧＥ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ＰＥＴ－３２ａ－ＶＰｌ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｉｎｄｕｃｅｄ?ｂｙ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＩＰＴＧ??Ｍ：?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｍｏｌｅｃｕｌａｒ?ｗｅｉｇｈｔ?ｍａｒｋｅｒ；?１－６：?ＰＥＴ－３２ａ－ＶＰｌ／?ＢＬ２１?ｉｎｄｕｃｅｄ?ｓｅｐａｒａｔｅｌｙ?ａｔ?Ｏ．ｌｍＭ、??０．４ｍＭ、０．８ｍＭ、１．２ｍＭ、１．６ｍＭ、２．０ｍＭＩＰＴＧ??３．?１．?４．?２優(yōu)化重組菌ｐＧＥＸ－６ｐ－ｌ－ＶＰｌ／ＢＬ２１表達(dá)條件??同上ＰＥＴ－３２ａ－ＶＰｌ／ＢＬ２１的方法對(duì)重組菌ｐＧＥＸ－６ｐ－ｌ－ＶＰｌ／ＢＬ２１表達(dá)的時(shí)間和ＩＰＴＧ??濃度進(jìn)行優(yōu)化，由圖３－８可見(jiàn)在ｌ．ＯｍＭＩＰＴＧ終濃度條件下，第６小時(shí)表達(dá)量最大；由圖??２８??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]HtsA表達(dá)質(zhì)�？寺『偷鞍踪|(zhì)的純化[J]. 宋英莉,呂春梅,張曉蘭,邊淑玲,徐杰,朱宛宛,朱輝.  哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2012(04)
[2]口蹄疫病毒單克隆抗體的制備及應(yīng)用研究進(jìn)展[J]. 楊沁,林彤,高閃電,�；菔|.  生物技術(shù)通訊. 2012(03)
[3]酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)在口蹄疫診斷中的研究進(jìn)展[J]. 厙大亮,李冬.  中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào). 2011(29)
[4]Evolution and molecular epidemiology of foot-and-mouth disease virus in China[J]. BAI XingWen*,LI PingHua,BAO HuiFang*,LIU ZaiXin*,LI Dong,LU ZengJun,CAO YiMei,SHANG YouJun,SHAO JunJun,CHANG HuiYun,LUO JianXun & LIU XiangTao State Key Laboratory of Veterinary Etiological Biology,National Foot-and-Mouth Disease Reference Laboratory,Engineering Research Center of Biological Detection of Gansu Province,Lanzhou Veterinary Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Lanzhou 730046,China.  Chinese Science Bulletin. 2011(21)
[5]A Simple and Rapid Colloidal Gold-based Immunochromatogarpic Strip Test for Detection of FMDV Serotype A[J]. Tao Jiang1,2,Zhong Liang2,Wei-wei Ren3,Juan Chen2,Xiao-ying Zhi3,Guang-yu Qi3,Xiang-tao Liu2 and Xue-peng Cai 2 (1.Veterinary Medicine,Gansu Agricultural University,Lanzhou 730070,China; 2. Key laboratory of Animal Virology of Ministry of Agriculture,State Key Laboratory of Veterinary Etiological Biology,Lanzhou Veterinary Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Lanzhou 730046,China; 3. China Agricultural Vet.Bio.Science and Technlolgy Co.,LTD,Lanzhou 730046,China).  Virologica Sinica. 2011(01)
[6]RDD基序?qū)谔阋逜sia1型毒株感染力的影響[J]. 鄭海學(xué),郭建宏,靳野,尚佑軍,田宏,楊亞民,劉湘濤,才學(xué)鵬.  科學(xué)通報(bào). 2010(14)
[7]口蹄疫病毒VP1基因的原核可溶性表達(dá)[J]. 王海烽,易忠,魏玉榮,魏婕,胡爾馬西,符子華.  中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2009(10)
[8]口蹄疫檢測(cè)技術(shù)的研究進(jìn)展與應(yīng)用[J]. 朱文釧,孔繁德,林祥梅,徐淑菲,吳德峰,韓雪清,吳紹強(qiáng).  經(jīng)濟(jì)動(dòng)物學(xué)報(bào). 2009(03)
[9]利用Asia1型口蹄疫病毒VP1蛋白的單克隆抗體建立單抗競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法[J]. 林彤,邵軍軍,叢國(guó)正,獨(dú)軍政,高閃電,常惠蕓,謝慶閣.  安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2009(23)
[10]C型口蹄疫病毒VP1基因的原核表達(dá)及重組蛋白的純化[J]. �；菔|,獨(dú)軍政,叢國(guó)正,邵軍軍,林彤,馮金瑞,劉萍.  畜牧與獸醫(yī). 2009(07)

碩士論文
[1]抗C型口蹄疫病毒VP1單克隆抗體的制備及初步應(yīng)用[D]. 楊沁.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[2]鵝細(xì)小病毒NS基因PCR和單抗競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)方法的建立及應(yīng)用[D]. 王倩.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[3]A型口蹄疫病毒結(jié)構(gòu)蛋白VP1單克隆抗體的制備及初步應(yīng)用[D]. 李菁.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2010



本文編號(hào)：3040807