口蹄疫俗稱“口瘡”,主要侵害牛、羊、豬等偶蹄動物,引起口、蹄、乳頭等部位會出現(xiàn)水泡形成糜爛。口蹄疫發(fā)病率高,傳播迅速,制約了畜牧業(yè)的發(fā)展以及動物和動物產品的國際貿易。近年來,口蹄疫A型從東南亞地區(qū)傳入我們東亞國家,使我國口蹄疫疫情變得更為嚴峻,因此,需要一種簡便、特異的檢測方法對該病進行診斷和監(jiān)測。本研究通過特異性引物擴增克隆口蹄疫A型病毒的VP1基因,構建表達質粒PET-32a-VP1和pGEX-6p-l-VP1,轉入BL21重組菌誘導表達融合蛋白,可溶性分析主要以包涵體形式存在。融合蛋白分別經His和GST柱層析純化,SDS-PAGE分析蛋白電泳純度較高,Western blot檢測能與口蹄疫A型多克隆抗體特異性結合,而不與O型和Asial型發(fā)生反應,表明融合蛋白具有良好的特異性和抗原性。用純化的融合蛋白PET-32a-VPl免疫6周齡的BALB/c雌性小鼠,經過3次免疫后測定效價均大于1:12800,可用于細胞融合。以純化的融合蛋白pGEX-6p-1-VP1作為包被抗原進行間接ELISA篩選陽性雜交瘤,經4次細胞亞克隆最終篩選出4株穩(wěn)定分泌抗口蹄疫A型VP1蛋白單抗的雜交瘤細胞株... 

【文章來源】：廣西大學廣西壯族自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數】：77 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１?口蹄疫病毒基因組示意圖??Ｆｉｇ．?１￣１?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｍａｐ?ｏｆ?ＦＭＤＶ?ｇｅｎｏｍｅ??

重組菌?ＰＥＴ－３２ａ－ＶＰｌ／ＢＬ２１?和?ｐＧＥＸ－６ｐ－ｌ－ＶＰ１／ＢＬ２１?裂解產物進行?ＳＤＳ－ＰＡＧＥ?電泳，??用考馬斯亮藍快速染色劑染色，可見重組菌的裂解產物分別在約４３．?６ＫＤａ和４９．?３ＫＤ的??蛋白條帶（

祖丨一￣＾一?／??圖３－７重組菌ＰＥＴ－３２ａ－ＶＰｌ／ＢＬ２１不同ＩＰＴＧ濃度誘導表達產物的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析??Ｍ：標準蛋白質分子量；１－６：分別為?Ｏ．ｌｍＭ、０．４ｍＭ、０．８ｘｎＭ、１．２ｍＭ、１．６ｍＭ、２．０ｍＭ?的??ＩＰＴＧ?濃度誘導?ＰＥＴ－３２ａ－ＶＰｌ／ＢＬ２１?表達??Ｆｉｇ．３－７?ＳＤＳ－ＰＡＧＥ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ＰＥＴ－３２ａ－ＶＰｌ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｉｎｄｕｃｅｄ?ｂｙ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＩＰＴＧ??Ｍ：?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｍｏｌｅｃｕｌａｒ?ｗｅｉｇｈｔ?ｍａｒｋｅｒ；?１－６：?ＰＥＴ－３２ａ－ＶＰｌ／?ＢＬ２１?ｉｎｄｕｃｅｄ?ｓｅｐａｒａｔｅｌｙ?ａｔ?Ｏ．ｌｍＭ、??０．４ｍＭ、０．８ｍＭ、１．２ｍＭ、１．６ｍＭ、２．０ｍＭＩＰＴＧ??３．?１．?４．?２優(yōu)化重組菌ｐＧＥＸ－６ｐ－ｌ－ＶＰｌ／ＢＬ２１表達條件??同上ＰＥＴ－３２ａ－ＶＰｌ／ＢＬ２１的方法對重組菌ｐＧＥＸ－６ｐ－ｌ－ＶＰｌ／ＢＬ２１表達的時間和ＩＰＴＧ??濃度進行優(yōu)化，由圖３－８可見在ｌ．ＯｍＭＩＰＴＧ終濃度條件下，第６小時表達量最大；由圖??２８??

【參考文獻】：
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碩士論文
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本文編號：3040807