弓形蟲是一種專性細(xì)胞內(nèi)寄生性原蟲,屬于頂復(fù)門,是引起人獸共患弓形蟲病的一種重要病原。弓形蟲病是人和哺乳動物感染率較高的寄生蟲病。目前臨床治療弓形蟲病的藥物十分有限,迫切需要尋找新的藥物靶點,用以研發(fā)治療弓形蟲病的新的藥物。頂質(zhì)體在弓形蟲體內(nèi)發(fā)揮著極其重要的功能,如參與合成脂肪酸、血紅素和類異戊二烯等弓形蟲生長所必須的營養(yǎng)物質(zhì)。頂質(zhì)體功能受損會導(dǎo)致蟲體死亡。因此頂質(zhì)體一直被視為理想的治療弓形蟲病的藥物靶點。甲硫氨酸氨基肽酶能夠切除新生肽鏈N端起始的甲硫氨酸,在甲硫氨酸的代謝、蛋白質(zhì)N端的翻譯后修飾、蛋白質(zhì)成熟等過程中發(fā)揮著重要的功能。甲硫氨酸氨基肽酶在很多人類疾病中作為重要藥物靶點得到了廣泛研究,然而弓形蟲甲硫氨酸氨基肽酶能否作為治療弓形蟲病的藥物靶點還尚未可知。本研究首先通過生物信息學(xué)分析對弓形蟲甲硫氨酸氨基肽酶進(jìn)行鑒定。在蟲體內(nèi)過表達(dá)弓形蟲甲硫氨酸氨基肽酶,通過激光共聚焦顯微鏡觀察其在蟲體內(nèi)的定位情況,發(fā)現(xiàn)弓形蟲編碼的三個甲硫氨酸氨基肽酶（TgMAP1a/b、TgMAP2）定位于蟲體胞漿,而TgMAP1c定位于頂質(zhì)體。為進(jìn)一步探究TgMAP1c在弓形蟲頂質(zhì)體上發(fā)揮的功能,首先利用蟲體... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
碩士學(xué)位論文評閱人、答辯委員會簽名表
摘要
abstract
主要符號對照表
第一章 緒論
    1.1 弓形蟲病
    1.2 抗弓形蟲藥物及藥物靶點的研究現(xiàn)狀
    1.3 弓形蟲的頂質(zhì)體
    1.4 甲硫氨酸氨基肽酶
    1.5 甲硫氨酸氨基肽酶作為藥物靶點的研究
    1.6 研究目的及意義
第二章 TgMAPs的生物信息學(xué)分析及其定位
    2.1 材料
        2.1.1 主要儀器
        2.1.2 實驗材料
    2.2 方法
        2.2.1 TgMAPs同源性分析與命名
        2.2.2 TgMAPs分子結(jié)構(gòu)分析
        2.2.3 TgMAP1a/b/c-GFP、TgMAP2-GFP重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.2.4 TgMAP1a/b/c-GFP、TgMAP2-GFP在蟲體內(nèi)的定位分析
    2.3 實驗結(jié)果
        2.3.1 TgMAPs同源性分析與命名
        2.3.2 TgMAPs分子結(jié)構(gòu)分析
        2.3.3 構(gòu)建TgMAP1a/b/c-GFP、TgMAP2-GFP過表達(dá)質(zhì)粒
        2.3.4 TgMAP1a/b/c-GFP、TgMAP2-GFP在蟲體內(nèi)的定位
    2.4 討論
    2.5 結(jié)論
第三章 TgMAP1c轉(zhuǎn)運肽的分析
    3.1 材料
        3.1.1 主要儀器
        3.1.2 實驗材料
    3.2 方法
        3.2.1 構(gòu)建TgMAP1c截短表達(dá)質(zhì)粒
        3.2.2 TgMAP1c截短表達(dá)蛋白在蟲體內(nèi)的定位分析
    3.3 實驗結(jié)果
        3.3.1 TgMAP1c截短表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.3.2 TgMAP1c截短表達(dá)蛋白與CPN60 的共定位
    3.4 討論
    3.5 結(jié)論
第四章 TgMAP1c條件性缺失蟲株的構(gòu)建
    4.1 材料
        4.1.1 主要儀器
        4.1.2 實驗材料
    4.2 方法
        4.2.1 TgMAP1c敲除質(zhì)粒的構(gòu)建
        4.2.2 TgMAP1c-3HA重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        4.2.3 TgMAP1c-3HA重組蟲株的構(gòu)建、篩選及鑒定
        4.2.4 TgMAP1c條件性缺失蟲株的構(gòu)建、篩選及鑒定
    4.3 實驗結(jié)果
        4.3.1 構(gòu)建TgMAP1c敲除質(zhì)粒
        4.3.2 構(gòu)建TgMAP1c-3HA重組質(zhì)粒
        4.3.3 構(gòu)建TgMAP1c-3HA重組蟲株及鑒定
        4.3.4 構(gòu)建TgMAP1c條件性缺失蟲株
    4.4 討論
    4.5 結(jié)論
第五章 TgMAP1c條件性缺失后的蟲體表型
    5.1 材料
        5.1.1 主要儀器
        5.1.2 實驗材料
    5.2 方法
        5.2.1 TgMAP1c缺失蟲株增殖水平的檢測
        5.2.2 TgMAP1c缺失蟲株復(fù)制水平的檢測
        5.2.3 TgMAP1c缺失蟲株入侵水平的檢測
        5.2.4 TgMAP1c缺失蟲株對頂質(zhì)體丟失的影響
        5.2.5 TgMAP1c缺失蟲株對頂質(zhì)體自身編碼基因轉(zhuǎn)錄水平的影響
        5.2.6 TgMAP1c缺失蟲株對弓形蟲毒力的影響
    5.3 實驗結(jié)果
        5.3.1 TgMAP1c缺失對蟲體增殖水平的影響
        5.3.2 TgMAP1c缺失對蟲體復(fù)制水平的影響
        5.3.3 TgMAP1c缺失對蟲體入侵水平的影響
        5.3.4 TgMAP1c缺失對蟲體頂質(zhì)體丟失的影響
        5.3.5 TgMAP1c缺失對蟲體頂質(zhì)體自身編碼基因轉(zhuǎn)錄水平的影響
        5.3.6 TgMAP1c缺失對弓形蟲毒力的影響
    5.4 討論
    5.5 結(jié)論
第六章 TgMAP1c補回蟲株的構(gòu)建及表型鑒定
    6.1 材料
        6.1.1 主要儀器
        6.1.2 實驗材料
    6.2 方法
        6.2.1 TgMAP1c補回載體的構(gòu)建
        6.2.2 TgMAP1c補回蟲株的構(gòu)建
        6.2.3 TgMAP1c補回蟲株的表型鑒定
    6.3 實驗結(jié)果
        6.3.1 構(gòu)建TgMAP1c/Δ429-697 補回載體
        6.3.2 TgMAP1c補回蟲株的構(gòu)建
        6.3.3 TgMAP1c補回蟲株的表型鑒定
    6.4 討論
    6.5 結(jié)論
第七章 討論
第八章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
作者簡歷



本文編號：3040094