在山羊妊娠過程中,胎盤是影響山羊胚胎發(fā)育和生長的重要因素。妊娠早期胎盤發(fā)育異常會造成流產(chǎn)、胎兒發(fā)育不良、發(fā)育遲緩等諸多問題。妊娠早期胎盤發(fā)育的調(diào)控機(jī)制復(fù)雜。TET（Ten-Eleven Translocation）蛋白家族在調(diào)控胚胎和胎盤發(fā)育等過程中具有重要作用,輸卵管與子宮內(nèi)膜細(xì)胞的死亡平衡會影響受精卵及早期胚胎的發(fā)育。但TETs是否參與早期胚胎發(fā)育過程中的輸卵管或子宮內(nèi)膜細(xì)胞的生命活動還不清楚。研究表明,外泌體在各種體液中均存在,并且含有多種蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、核酸等生物成分,可以作為細(xì)胞間通訊載體,能夠介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞之間、細(xì)胞與組織之間生物信息的轉(zhuǎn)運(yùn),進(jìn)而調(diào)節(jié)靶細(xì)胞或靶組織的功能。目前關(guān)于山羊體液外泌體的分離、鑒定及對胎盤發(fā)育的調(diào)控功能等方面還鮮有研究。本研究以山羊為研究對象,首先探究了空配19d（C19）與妊娠19d（P19）山羊輸卵管及子宮角中TETs及細(xì)胞程序性死亡相關(guān)基因、炎癥相關(guān)基因的表達(dá)規(guī)律,并分析了TETs與細(xì)胞程序性死亡基因之間的相關(guān)關(guān)系;其次,抽提、鑒定C19組及P19組子宮液外泌體,并研究了山羊子宮液對胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞增殖的影響;最后,對非妊娠（NP）及妊娠30d（P... 

【文章來源】：西南大學(xué)重慶市 211工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：碩士

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摘要
ABSTRACT
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第1章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 哺乳動物妊娠早期胚胎發(fā)育和附植
    1.2 妊娠早期胚胎發(fā)育及附植的分子調(diào)控
        1.2.1 哺乳動物妊娠早期胚胎附植標(biāo)記基因
        1.2.2 TET家族參與調(diào)控妊娠早期胚胎發(fā)育及附植
        1.2.3 細(xì)胞程序性死亡相關(guān)基因參與調(diào)控妊娠早期胚胎發(fā)育及附植
    1.3 外泌體對妊娠早期胚胎發(fā)育及附植的調(diào)控
        1.3.1 外泌體的研究進(jìn)展
        1.3.2 外泌體在哺乳動物妊娠中的生物學(xué)功能
        1.3.3 外泌體與妊娠相關(guān)疾病的關(guān)系
    1.4 本研究的目的及意義
第2章 TETs與細(xì)胞程序性死亡相關(guān)基因在妊娠早期山羊輸卵管及子宮角表達(dá)研究
    2.1 引言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 試驗儀器
        2.2.2 材料試劑
        2.2.3 試驗動物
        2.2.4 HE染色試驗
        2.2.5 基因表達(dá)檢測
        2.2.6 結(jié)果統(tǒng)計與分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 子宮角的組織形態(tài)變化
        2.3.2 胚胎附植標(biāo)志基因在子宮角中的表達(dá)
        2.3.3 TETs在輸卵管及子宮角的表達(dá)
        2.3.4 細(xì)胞程序性死亡相關(guān)基因在輸卵管和子宮角中的表達(dá)
        2.3.5 TETs與細(xì)胞程序性死亡相關(guān)基因之間的相關(guān)性分析
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第3章 山羊子宮液外泌體對胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞增殖的影響
    3.1 引言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 試驗儀器
        3.2.2 材料試劑
        3.2.3 試驗動物
        3.2.4 超速離心步驟
        3.2.5 外泌體形態(tài)觀察
        3.2.6 BCA法測定蛋白濃度
        3.2.7 蛋白免疫印跡（Western blotting）
        3.2.8 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.2.9 細(xì)胞增殖試驗
        3.2.10 DIL標(biāo)記外泌體進(jìn)入胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞
        3.2.11 qRT-PCR檢測mRNA的表達(dá)量
        3.2.12 結(jié)果統(tǒng)計與分析
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 子宮液總蛋白含量變化
        3.3.2 檢測不同濃度子宮液對山羊胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞增殖的影響
        3.3.3 山羊子宮液對胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞增殖和凋亡相關(guān)基因的影響
        3.3.4 山羊子宮液外泌體的抽提與鑒定
        3.3.5 山羊子宮液外泌體總蛋白測定及標(biāo)志蛋白檢測
        3.3.6 DIL標(biāo)記的外泌體進(jìn)入胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞
        3.3.7 山羊子宮液外泌體對胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞增殖的影響
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
第4章 妊娠早期山羊血漿外泌體對胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞增殖mi RNAs的篩選鑒定
    4.1 引言
    4.2 材料與方法
        4.2.1 試驗儀器
        4.2.2 材料試劑
        4.2.3 試驗動物
        4.2.4 超速離心步驟
        4.2.5 外泌體形態(tài)觀察
        4.2.6 BCA蛋白濃度測定
        4.2.7 蛋白免疫印跡（Western blotting）
        4.2.8 細(xì)胞增殖試驗
        4.2.9 DIL標(biāo)記外泌體進(jìn)入胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞
        4.2.10 血漿外泌體RNA提取
        4.2.11 血漿外泌體miRNA的測序分析
        4.2.12 結(jié)果統(tǒng)計與分析
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 山羊血漿外泌體的抽提與鑒定
        4.3.2 山羊血漿外泌體總蛋白測定及標(biāo)志蛋白檢測
        4.3.3 DIL標(biāo)記的外泌體進(jìn)入胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞
        4.3.4 山羊血漿外泌體對胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞增殖的影響
        4.3.5 測序數(shù)據(jù)及其質(zhì)量控制
        4.3.6 差異表達(dá)miRNAs分析
        4.3.7 差異表達(dá)miRNA靶基因預(yù)測及功能分析
    4.4 討論
    4.5 小結(jié)
第5章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
在學(xué)期間發(fā)表的文章


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3037779