鴨疫里默氏桿菌病是由鴨疫里默氏桿菌（Riemerella anatipestifer, RA）引起的,廣泛分布于世界各個(gè)養(yǎng)鴨國(guó)家的,目前最重要的傳染病之一。RA菌株的血清型眾多,目前為止,共報(bào)道有21個(gè)血清型,各血清型之間無(wú)交叉保護(hù)。本實(shí)驗(yàn)室前期進(jìn)行的血清學(xué)研究結(jié)果表明流行菌株的優(yōu)勢(shì)血清型是血清1、2和10型。然而,我們對(duì)于鴨疫里默氏桿菌的分子致病機(jī)制還知之甚少。本研究檢測(cè)了鴨疫里默氏桿菌（RA）10個(gè)基因在不同菌株間的分布并進(jìn)行序列分析,研究其在不同菌株中的保守性。研究發(fā)現(xiàn)了3個(gè)鴨疫里默氏桿菌的具有高度保守性的基因：lipid A、 luxE和tctR;6個(gè)可能的血清型相關(guān)基因：TR、luxE、IS1、tctR、luxrl和TA；以及5個(gè)可能的毒力相關(guān)基因：cwaH、lipid A、luxE、IS1和tctR。同時(shí),發(fā)現(xiàn)luxE基因既可能與細(xì)菌的致病性相關(guān),又可能與細(xì)菌的血清型相關(guān)。因此,我們進(jìn)一步研究了該基因?qū)A的生物學(xué)特性影響。本文采用同源重組的方法來構(gòu)建鴨疫里默氏桿菌Yb2株的luxE基因缺失株Yb2△luxE和luxE基因回復(fù)株cYb2△luxE。具體方法為：通過PCR擴(kuò)增... 

【文章來源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：71 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
圖標(biāo)清單
英文縮略表
第一章 引言
    1.1 概述
        1.1.1 病原學(xué)
        1.1.2 血清型
    1.2 全基因組序列的發(fā)表
    1.3 毒力因子
    1.4 Acyl-protein synthetases和Acyl transferase的研究進(jìn)展
        1.4.1 Lux操縱子的概述
        1.4.2 發(fā)光細(xì)菌中l(wèi)uxE基因的研究進(jìn)展
        1.4.3 脂多糖�；c免疫應(yīng)答的關(guān)系
    1.5 展望
第二章 鴨疫里默氏桿菌10個(gè)基因在菌株中的分布及序列分析
    2.1 材料與方法
        2.1.1 材料
        2.1.2 基因選擇、引物設(shè)計(jì)與合成
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 測(cè)定10個(gè)基因在RA菌株中的分布情況
        2.2.2 PCR產(chǎn)物的純化與克隆
        2.2.3 序列分析和系統(tǒng)進(jìn)化樹的建立
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 10個(gè)基因在RA菌株中的分布情況
        2.3.2 PCR產(chǎn)物的克隆和鑒定
        2.3.3 序列測(cè)定與分析
        2.3.4 系統(tǒng)進(jìn)化樹的繪制
    2.4 討論
第三章 鴨疫里默氏桿菌LUXE基因缺失株的構(gòu)建及生物學(xué)特性分析
    3.1 材料
        3.1.1 菌株和培養(yǎng)條件
        3.1.2 主要酶、載體及試劑
        3.1.3 主要培養(yǎng)基及緩沖液的配制
        3.1.4 抗生素及使用濃度
        3.1.5 主要儀器設(shè)備
        3.1.6 PCR引物
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 提取鴨疫里默氏桿菌Yb2株基因組
        3.2.2 鴨疫里默氏桿菌Yb2株luxE基因的克隆及測(cè)序
        3.2.3 鴨疫里默氏桿菌Yb2 luxE基因同源性左右臂片段的克隆
        3.2.4 壯觀霉素抗性基因（Spc）的擴(kuò)增與序列測(cè)定
        3.2.5 重組質(zhì)粒pGEM-T easy-luxE-L-Spc-R的構(gòu)建
        3.2.6 自殺性重組質(zhì)粒pDS132-luxE-LSR的構(gòu)建
        3.2.7 鴨疫里默氏桿菌Yb2株△luxE基因缺失株的篩選及鑒定
        3.2.8 鴨疫里默氏桿菌Yb2△luxE基因缺失株的基因互補(bǔ)試驗(yàn)
        3.2.9 檢測(cè)luxE基因缺失對(duì)上下游基因的影響
        3.2.10 鴨疫里默氏桿菌Yb2△luxE以及cYb2△luxE的生物學(xué)特性研究
    3.3 試驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 鴨疫里默氏桿菌Yb2 luxE基因同源性左右臂片段的克隆
        3.3.2 壯觀霉素抗性基因（Spc）的擴(kuò)增
        3.3.3 重組質(zhì)粒pGEM-T easy-LSR的構(gòu)建
        3.3.4 自殺性重組質(zhì)粒pDS132-luxE-LSR
        3.3.5 Yb2△luxE基因缺失株的篩選及鑒定
        3.3.6 Yb2△luxE基因缺失株的基因互補(bǔ)試驗(yàn)
        3.3.7 熒光定量檢測(cè)luxE基因缺失對(duì)上下游基因的影響
        3.3.8 鴨疫里默氏桿菌Yb2△luxE以及cYb2△luxE的生物學(xué)特性研究
    3.4 討論
全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]血清10型鴨疫里默氏桿菌滅活油乳劑疫苗的研制[J]. 王小蘭,劉蕾,劉海文,苗雙,胡青海,韓先干,丁鏟,于圣青.  中國(guó)家禽. 2012(15)
[2]血清1型鴨疫里默氏桿菌滅活油乳劑疫苗的研制[J]. 王小蘭,胡青海,童永亮,韓先干,丁鏟,于圣青.  中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2012(04)
[3]血清2型鴨疫里默氏桿菌制苗用菌株的篩選及滅活油乳劑疫苗的研制[J]. 王小蘭,胡青海,韓先干,丁鏟,于圣青.  中國(guó)動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào). 2012(01)
[4]酰基轉(zhuǎn)移酶研究[J]. 范東東,孫銘娟,王梁華,焦炳華.  生命的化學(xué). 2008(06)
[5]Effect of Porphyromonas gingivalis PrtC on cytokine expression in ECV304 endothelial cells and its level in subgingival plaques from patients with chronic periodontitis[J]. Yan-min WU~2,Li-li CHEN~(2,6),Jie YAN~(3,6),Chun-yan ZHUANG~4,Zhi-yuan GU~5~2 Department of Stomatology,the Second Affiliated Hospital,College of Medicine,Zhejiang University,Hangzhou 310009,China;~3 Depart-ment of Medical Microbiology and Parasitology,College of Medicine,Zhejiang University,Hangzhou 310006,China;~4 Department ofStomatology,the Affiliated Hospital of the School of Medicine,Ningbo University,Ningbo 315020,China;~5 Department of Oral andMaxillofacial Surgery,the Affiliated Hospital of Stomatology,College of Medicine,Zhejiang University,Hangzhou 310006,China.  Acta Pharmacologica Sinica. 2007(07)
[6]7型鴨疫里氏桿菌分離株的鑒定[J]. 張大丙,郭玉璞.  中國(guó)獸醫(yī)雜志. 2003(05)
[7]血清8型鴨疫里墨氏桿菌在我國(guó)的發(fā)現(xiàn)及其病原特性研究[J]. 汪銘書,程安春,陳孝躍,劉兆宇,方鵬飛,郭宇飛.  中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2003(01)
[8]血清4型鴨疫里默氏桿菌在我國(guó)的發(fā)現(xiàn)及其病原特性研究[J]. 汪銘書,程安春,陳孝躍,劉兆宇,方鵬飛,郭宇飛.  中國(guó)獸醫(yī)雜志. 2002(12)
[9]血清5型鴨疫里氏桿菌在我國(guó)的發(fā)現(xiàn)及其病原特性研究[J]. 汪銘書,程安春,陳孝躍,劉兆宇,方鵬飛,郭宇飛.  中國(guó)獸醫(yī)科技. 2002(09)
[10]15型鴨疫里氏桿菌分離株的鑒定[J]. 張大丙,郭玉璞.  中國(guó)獸醫(yī)雜志. 2002(03)

博士論文
[1]鴨疫里默氏桿菌致病相關(guān)因子研究[D]. 李繼祥.西南大學(xué) 2009



本文編號(hào)：3036908