為研究miR-10b對(duì)山羊卵巢顆粒細(xì)胞活性的影響,從已建立的多羔（3～5只）和單羔奶山羊發(fā)情期卵巢組織差異表達(dá)的miRNAs文庫(kù)中篩選出差異表達(dá)顯著的miR-10b,并利用生物信息學(xué)和實(shí)時(shí)定量PCR等技術(shù),研究miR-10b在單羔和多羔奶山羊中的相對(duì)表達(dá)水平及其靶基因表達(dá)和卵巢顆粒細(xì)胞活性。結(jié)果顯示:miR-10b在單羔奶山羊卵巢組織中的相對(duì)表達(dá)量顯著高于多羔奶山羊卵巢組織中的相對(duì)表達(dá)量（P<0.05）;miR-10b通過(guò)抑制腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（BDNF）基因的表達(dá),實(shí)現(xiàn)對(duì)卵巢顆粒細(xì)胞活性的抑制作用。試驗(yàn)結(jié)果闡釋了miR-10b作用于奶山羊卵巢顆粒細(xì)胞的機(jī)理,為后續(xù)研究山羊卵巢的卵泡發(fā)育提供了依據(jù)。 

【文章來(lái)源】：家畜生態(tài)學(xué)報(bào). 2018,39(12)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 質(zhì)粒與細(xì)胞
    1.2 試劑及儀器
    1.3 試驗(yàn)方法
        1.3.1 miR-10b的差異表達(dá)與靶基因的預(yù)測(cè)
        1.3.2 BDNF 3'UTR片段的克隆與BDNF 3'UTR熒光素酶報(bào)告基因載體的構(gòu)建
        1.3.3 細(xì)胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染
        1.3.4 總RNA提取及實(shí)時(shí)定量PCR
        1.3.5 熒光素酶活性檢測(cè)
        1.3.5 顆粒細(xì)胞活性試驗(yàn) （MTT）
    1.4 統(tǒng)計(jì)分析
2 結(jié)果與分析
    2.1 miR-10b的差異表達(dá)
    2.2 miRNA靶基因生物信息學(xué)預(yù)測(cè)結(jié)果與BD-NF3'UTR的RCR擴(kuò)增
    2.3 pGL3-BDNF 3'UTR載體酶切鑒定結(jié)果
    2.4 熒光素酶活性檢測(cè)
    2.5 實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)靶基因mRNA表達(dá)水平
    2.6 miR-10b對(duì)顆粒細(xì)胞活性的影響
    2.7 BDNF因子對(duì)顆粒細(xì)胞活性的影響
    2.8 BDNF因子和miR-10b對(duì)顆粒細(xì)胞活性的影響
3 討論
4 結(jié)論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]BDNF和NGF對(duì)牛顆粒細(xì)胞體外生長(zhǎng)的影響[J]. 易康樂(lè),陳華海,李純錦,孫艷玲,陳露,石德順,周虛.  中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2010(11)



本文編號(hào)：3033008