為研究miR-10b對山羊卵巢顆粒細胞活性的影響,從已建立的多羔（3～5只）和單羔奶山羊發(fā)情期卵巢組織差異表達的miRNAs文庫中篩選出差異表達顯著的miR-10b,并利用生物信息學和實時定量PCR等技術,研究miR-10b在單羔和多羔奶山羊中的相對表達水平及其靶基因表達和卵巢顆粒細胞活性。結果顯示:miR-10b在單羔奶山羊卵巢組織中的相對表達量顯著高于多羔奶山羊卵巢組織中的相對表達量（P<0.05）;miR-10b通過抑制腦源性神經營養(yǎng)因子（BDNF）基因的表達,實現(xiàn)對卵巢顆粒細胞活性的抑制作用。試驗結果闡釋了miR-10b作用于奶山羊卵巢顆粒細胞的機理,為后續(xù)研究山羊卵巢的卵泡發(fā)育提供了依據(jù)。 

【文章來源】：家畜生態(tài)學報. 2018,39(12)北大核心

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 質粒與細胞
    1.2 試劑及儀器
    1.3 試驗方法
        1.3.1 miR-10b的差異表達與靶基因的預測
        1.3.2 BDNF 3'UTR片段的克隆與BDNF 3'UTR熒光素酶報告基因載體的構建
        1.3.3 細胞培養(yǎng)及轉染
        1.3.4 總RNA提取及實時定量PCR
        1.3.5 熒光素酶活性檢測
        1.3.5 顆粒細胞活性試驗 （MTT）
    1.4 統(tǒng)計分析
2 結果與分析
    2.1 miR-10b的差異表達
    2.2 miRNA靶基因生物信息學預測結果與BD-NF3'UTR的RCR擴增
    2.3 pGL3-BDNF 3'UTR載體酶切鑒定結果
    2.4 熒光素酶活性檢測
    2.5 實時定量PCR檢測靶基因mRNA表達水平
    2.6 miR-10b對顆粒細胞活性的影響
    2.7 BDNF因子對顆粒細胞活性的影響
    2.8 BDNF因子和miR-10b對顆粒細胞活性的影響
3 討論
4 結論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]BDNF和NGF對牛顆粒細胞體外生長的影響[J]. 易康樂,陳華海,李純錦,孫艷玲,陳露,石德順,周虛.  中國獸醫(yī)學報. 2010(11)



本文編號：3033008