發(fā)布時間：2021-02-13 02:44

　　免疫抑制性受體傳遞免疫抑制和免疫耐受信號,是獲得性免疫調(diào)節(jié)的重要分子,包括程序性死亡因子1 （programmed death-1, PD-1）、細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4 （cytotoxic T lymphocyte-associated antigen-4, CTLA-4）和淋巴細(xì)胞活化基因-3（lymphocyte activation gene-3, LAG-3）等。多種慢性或持續(xù)性病毒感染過程中,PD-1、CTLA-4或LAG-3等過量表達(dá),活化免疫負(fù)調(diào)節(jié)信號通路,引起免疫細(xì)胞凋亡、增殖能力降低以及抗病毒細(xì)胞因子分泌減少等,造成機(jī)體免疫功能損傷或免疫抑制,阻斷PD-1、CTLA-4、LAG-3與其相應(yīng)配體相互作用,可以逆轉(zhuǎn)T細(xì)胞免疫功能。豬瘟（classical swine fever, CSF）和斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征（Postweaning Multisystemic Wasting Syndrome, PMWS）是豬的兩種重要傳染性疾病,目前對CSF和PMWS引起免疫功能損傷或免疫抑制的致病機(jī)制已經(jīng)從病原和宿主兩方面進(jìn)行了深入廣泛的研究,但是,在宿主效應(yīng)細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)... 

【文章來源】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)四川省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：103 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1. 免疫抑制性受體的研究進(jìn)展
        1.1 PD-1及其配體的發(fā)現(xiàn)和結(jié)構(gòu)鑒定
        1.2 PD-1/PD-Ls分子傳導(dǎo)通路
        1.3 PD-1和PD-Ls的表達(dá)和調(diào)節(jié)
        1.4 PD-1/PD-L1通路與病毒感染
        1.5 免疫抑制性受體CTLA-4和LAG-3的研究進(jìn)展
        1.6 豬免疫抑制性受體的研究進(jìn)展
    2. 豬瘟致病機(jī)制研究進(jìn)展
        2.1 豬瘟
        2.2 豬瘟病毒
        2.3 CSFV免疫致病機(jī)制
    3. 斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征致病機(jī)制研究進(jìn)展
        3.1 斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征
        3.2 PMWS病原
        3.3 PMWS免疫致病機(jī)制
    4. 本課題研究目的與意義
第二章 豬感染CSFV后PD-1及其配體轉(zhuǎn)錄水平研究
    1. 引言
    2. 材料與方法
        2.1 病毒、細(xì)胞和試驗動物
        2.2 主要生物學(xué)試劑
        2.3 主要溶液配制
        2.4 主要儀器
50的測定">        2.5 CSFV的繁殖及TCID₅₀的測定
            2.5.1 CSFV繁殖
50測定">            2.5.2 CSFV TCID₅₀測定
        2.6 實時熒光定量PCR（qPCR）檢測目的基因mRNA方法的建立
            2.6.1 引物設(shè)計與合成
            2.6.2 PBMC分離
            2.6.3 PBMCs中總RNA抽提
            2.6.4 反轉(zhuǎn)錄合成cDNA
            2.6.5 qPCR陽性標(biāo)準(zhǔn)品制備
            2.6.6 qPCR標(biāo)準(zhǔn)曲線建立
        2.7 Taqman探針qPCR檢測CSFV方法的建立
            2.7.1 引物與探針的設(shè)計與合成
            2.7.2 Taqman探針qPCR陽性標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備
            2.7.3 Taqman探針qPCR標(biāo)準(zhǔn)曲線建立
            2.7.4 敏感性試驗
            2.7.5 特異性試驗
        2.8 檢測CSFV感染過程中PD-1與其配體轉(zhuǎn)錄水平及免疫效應(yīng)變化
            2.8.1 人工感染CSFV
            2.8.2 qPCR檢測PD-1、PD-L1、PD-L2及其細(xì)胞因子IL-2和IL-10
            2.8.3 qPCR結(jié)果分析
            2.8.4 檢測血漿中CSFV載量
            2.8.5 T細(xì)胞增殖能力檢測
    3. 結(jié)果與分析
50的測定">        3.1 CSFV鑒定與TCID₅₀的測定
        3.2 qPCR檢測PD-1、PD-L1、PD-L2及細(xì)胞因子IL-2、IL-10標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
        3.3 Taqman探針qPCR檢測CSFV方法的建立
            3.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
            3.3.2 敏感性
            3.3.3 特異性
        3.4 人工感染CSFV
        3.5 感染CSFV過程中PD-1、PD-L1和PD-L2 mRNA轉(zhuǎn)錄變化
        3.6 感染CSFV過程中IL-2和IL-10 mRNA轉(zhuǎn)錄變化和T細(xì)胞增殖能力的檢測
        3.7 血漿中CSFV載量
    4. 討論
        4.1 PD-1及其配體PD-L1和PD-L2表達(dá)
        4.2 細(xì)胞因子IL-2和IL-10表達(dá)及T細(xì)胞增殖能力
        4.3 CSFV載量
    5. 小結(jié)
第三章 自然感染PCV2后免疫抑制性受體轉(zhuǎn)錄水平研究
    1. 引言
    2. 材料與方法
        2.1 主要生物學(xué)試劑
        2.2 主要溶液配制
        2.3 主要儀器設(shè)備
        2.4 試驗動物
        2.5 qPCR引物設(shè)計與合成
        2.6 qPCR檢測目的基因方法的建立
        2.7 自然PCV2感染過程中主要免疫抑制性受體及細(xì)胞因子轉(zhuǎn)錄水平研究
            2.7.1 試驗動物
            2.7.2 PMWS的PCR病原檢測
            2.7.3 qPCR檢測免疫抑制性受體和細(xì)胞因子轉(zhuǎn)錄水平
            2.7.4 檢測PBMCs增殖能力
    3. 結(jié)果與分析
        3.1 qPCR檢測CTLA-4、LAG-3、PTEN及細(xì)胞因子IFN-γ標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
        3.2 PMWS的病原檢測
        3.3 qPCR檢測主要免疫抑制性受體的基因轉(zhuǎn)錄水平
        3.4 qPCR檢測細(xì)胞因子IL-2、IFN-γ和IL-10轉(zhuǎn)錄變化
        3.5 PBMCs增殖
    4. 討論
        4.1 病原檢測
        4.2 PCV2感染后免疫抑制性受體和配體的表達(dá)
        4.3 PCV2感染后細(xì)胞因子表達(dá)與PBMC增殖
    5. 小結(jié)
第四章 阻斷豬PD-1/PD-L1通路的多肽基序鑒定
    1. 引言
    2. 材料與方法
        2.1 主要試劑及免疫動物
        2.2 主要溶液配制
        2.3 主要儀器設(shè)備
        2.4 固相法合成多肽基本流程
        2.5 多肽設(shè)計
        2.6 固相法合成多肽程序
            2.6.1 溶脹Rink amide-MBHA Resin樹脂
            2.6.2 多肽合成�；绦�
            2.6.3 Kaiser法檢測多肽合成縮合反應(yīng)
            2.6.4 脫保護(hù)基團(tuán)
            2.6.5 多肽合成重復(fù)程序
            2.6.6 TFA法裂解多肽
            2.6.7 合成多肽沉淀及脫鹽純化
            2.6.8 鑒定合成多肽純度及結(jié)構(gòu)特性
        2.7 多肽的溶解
        2.8 多肽標(biāo)記FITC
        2.9 多肽PD-15阻斷PD-1/PD-L1通路促進(jìn)PBMC增殖能力
        2.10 多肽PD-15與豬重組蛋白PD-L1結(jié)合
        2.11 FITC標(biāo)記多肽與PBMC結(jié)合
        2.12 多肽PD-15作為佐劑免疫效果評價
            2.12.1 免疫小鼠
            2.12.2 ELISA檢測抗體水平
    3. 結(jié)果與分析
        3.1 多肽PD-15阻斷后對PBMCs增殖影響
        3.2 多肽PD-15與豬重組蛋白PD-L1的結(jié)合
        3.3 多肽PD-15與PBMCs結(jié)合
        3.4 測定多肽PD-15純度及氨基酸序列
        3.5 多肽PD-15對體液免疫的影響
    4. 討論
        4.1 固相多肽合成
        4.2 多肽溶解
        4.3 多肽阻斷PD-1/PD-L1通路促進(jìn)PBMC增殖
        4.5 PD-15作為免疫佐劑對抗體水平的影響
    5. 小結(jié)
第五章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄1 患PMWS斷奶仔豬圖片
博士期間發(fā)表論文及成果


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]豬瘟國際流行態(tài)勢、我國現(xiàn)狀及防制對策[J]. 涂長春.  中國農(nóng)業(yè)科學(xué). 2003(08)
[2]我國豬瘟的流行病學(xué)現(xiàn)狀分析[J]. 呂宗吉,涂長春,余興龍,吳健敏,李月紅,馬剛,張茂林.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報. 2001(04)
[3]規(guī)�；i場豬瘟、細(xì)小病毒、口蹄疫抗體水平監(jiān)測和免疫效果分析[J]. 何啟蓋,陳煥春,吳斌,索緒峰,方六榮,汪超.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報. 2000(01)

博士論文
[1]豬程序性死亡因子1的克隆鑒定以及豬繁殖與呼吸綜合征病毒感染對PD-1/PD-L通路的影響[D]. 彭金美.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010

碩士論文
[1]豬瘟病毒感染靶細(xì)胞的配體表位研究[D]. 岳鋒.河南科技學(xué)院 2010



本文編號：3031841