自然殺傷性細(xì)胞（NK）和細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（CTL）在機(jī)體免疫防御系統(tǒng)中與中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞一起發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。抗菌肽NK-lysin存在于機(jī)體NK細(xì)胞和CTL細(xì)胞中，和人類的顆粒溶素（GNLY）是同源多肽，是天然免疫反應(yīng)的主要組成部分，是連接適應(yīng)性免疫反應(yīng)和獲得性免疫反應(yīng)的紐帶。近年來，抗生素藥物的濫用使藥物殘留和細(xì)菌耐藥性問題日益嚴(yán)重，嚴(yán)重威脅著畜牧業(yè)發(fā)展和人類健康，新型抗菌藥物的研發(fā)成為迫切需要�？咕某蔀樾滦涂咕幬镅邪l(fā)的理想選擇，在替代傳統(tǒng)抗生素方面有著潛在的應(yīng)用價值，具有廣闊的市場前景。NK-Lysin的同源物顆粒溶素的研究已經(jīng)進(jìn)入臨床階段，而對NK-Lysin的功能和應(yīng)用研究則較少。本研究探索綿羊NK-Lysin的原核表達(dá)方法，并分析其抗菌核心區(qū)域的結(jié)構(gòu)和功能，通過化學(xué)合成綿羊抗菌肽NK-Lysin蛋白的主要功能多肽，檢測合成多肽的抑菌譜和抑菌活性，利用雛雞感染治療模型驗(yàn)證綿羊抗菌肽對細(xì)菌感染的治療作用，為綿羊抗菌肽NK-Lysin的功能研究和臨床應(yīng)用提供了科學(xué)資料。1、綿羊抗菌肽NK-Lysin的原核表達(dá)分析根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室克隆的綿羊NK-Lysin基因GenBan... 

【文章來源】：石河子大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū) 211工程院校

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【學(xué)位級別】：碩士

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中文摘要
Abstract
英文縮略詞表
前言
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 抗菌肽的來源及分類
        1.1 天然抗菌肽
            1.1.1 微生物抗菌肽
            1.1.2 真菌抗菌肽
            1.1.3 植物抗菌肽
            1.1.4 動物抗菌肽
        1.2 化學(xué)合成抗菌肽
        1.3 基因工程抗菌肽
            1.3.1 大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)抗菌肽
            1.3.2 酵母表達(dá)系統(tǒng)抗菌肽
            1.3.3 枯草芽胞桿菌表達(dá)系統(tǒng)抗菌肽
            1.3.4 昆蟲表達(dá)系統(tǒng)抗菌肽
        1.4 酶解法抗菌肽
        1.5 根據(jù)抗菌肽的結(jié)構(gòu)分類
            1.5.1 α-螺旋結(jié)構(gòu)抗菌肽
            1.5.2 β折疊結(jié)構(gòu)抗菌肽
            1.5.3 無規(guī)則卷曲結(jié)構(gòu)多肽
            1.5.4 Loop 環(huán)狀結(jié)構(gòu)抗菌肽
    2 抗菌肽的生物學(xué)功能及應(yīng)用
        2.1 抗細(xì)菌活性
        2.2 抗真菌活性
        2.3 抗病毒活性
        2.4 抗腫瘤活性
        2.5 抗原蟲活性
        2.6 免疫調(diào)節(jié)作用
        2.7 促進(jìn)傷口愈合作用
    3 抗菌肽的抑菌機(jī)制及活性結(jié)構(gòu)
        3.1 抗菌肽的抑菌機(jī)制
            3.1.1 細(xì)胞膜損傷機(jī)制
            3.1.2 細(xì)胞內(nèi)損傷機(jī)制
        3.2 抗菌肽的活性結(jié)構(gòu)
            3.2.1 抗菌肽的一級結(jié)構(gòu)
            3.2.2 抗菌肽的α-螺旋結(jié)構(gòu)
            3.2.3 抗菌肽的疏水性
            3.2.4 抗菌肽的兩親性
            3.2.5 抗菌肽的凈電荷
    4 衍生抗菌肽分子的設(shè)計(jì)
        4.1 衍生抗菌肽分子的設(shè)計(jì)方法
            4.1.1 氨基酸序列修飾法
            4.1.2 活性結(jié)構(gòu)優(yōu)化法
            4.1.3 雜合抗菌肽法
    5 大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)
        5.1 大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)的構(gòu)成
            5.1.1 目的基因
            5.1.2 表達(dá)載體
            5.1.3 表達(dá)宿主菌
        5.2 大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)的影響因素
            5.2.1 表達(dá)載體的種類
            5.2.2 目的基因的密碼子
            5.2.3 mRNA 的穩(wěn)定性
            5.2.4 誘導(dǎo)、培養(yǎng)條件
        5.3 pET 表達(dá)系統(tǒng)
    參考文獻(xiàn)
第二章 實(shí)驗(yàn)部分
    實(shí)驗(yàn)一 綿羊 NK-Lysin 在大腸桿菌中的表達(dá)分析
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 材料
                1.1.1 菌株與載體
                1.1.2 主要試劑
                1.1.3 儀器
            1.2 方法
                1.2.1 引物設(shè)計(jì)與合成
                1.2.2 NK-Lysin-X 目的基因 PCR 擴(kuò)增
                1.2.3 NK-Lysin-X 的 PCR 產(chǎn)物回收
                1.2.4 NK-Lysin-X 克隆載體的構(gòu)建
                1.2.5 NK-Lysin-X 克隆載體的轉(zhuǎn)化
                1.2.6 NK-Lysin-X 克隆載體鑒定
                1.2.7 NK-Lysin-X 原核表達(dá)載體的構(gòu)建
                1.2.8 NK-Lysin-X 原核表達(dá)載體的鑒定
                1.2.9 NK-Lysin-X 在 DE3 中的誘導(dǎo)表達(dá)
        2 結(jié)果
            2.1 NK-Lysin-X 目的基因 PCR 擴(kuò)增
            2.2 NK-Lysin-X 克隆載體菌液 PCR 鑒定
            2.3 NK-Lysin-X 克隆載體雙酶切鑒定
            2.4 表達(dá)載體的雙酶切
            2.5 NK-Lysin-X 原核表達(dá)載體的菌液 PCR 鑒定
            2.6 NK-Lysin-X 原核表達(dá)載體雙酶切
            2.7 NK-Lysin-X 誘導(dǎo)表達(dá)的 SDS-PAGE 檢測
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
    實(shí)驗(yàn)二 綿羊抗菌肽 NK-Lysin 功能區(qū)的設(shè)計(jì)合成及其生物學(xué)功能研究
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 材料
                1.1.1 抗菌肽
                1.1.2 菌株與細(xì)胞系
                1.1.3 主要試劑
                1.1.4 儀器
            1.2 方法
                1.2.1 抗菌肽序列的選擇和結(jié)構(gòu)分析預(yù)測
                1.2.2 固體培養(yǎng)基徑向擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)
                1.2.3 最小抑菌濃度測定
                1.2.4 合成多肽的抗腫瘤細(xì)胞活性
        2 結(jié)果
            2.0 合成多肽的序列及二級結(jié)構(gòu)
            2.1 多肽的抑菌效果
            2.2 微量肉湯稀釋法的 MIC 測定結(jié)果
            2.3 多肽對腫瘤細(xì)胞的殺傷作用
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
    實(shí)驗(yàn)三 合成綿羊抗菌肽 NK559777-18、NK7652-23 對雛雞沙門氏菌感染的治療研究
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 材料
                1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
                1.1.2 主要試劑
                1.1.3 主要儀器
            1.2 方法
                1.2.1 沙門氏菌的準(zhǔn)備
                1.2.2 吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
                1.2.3 雛雞沙門氏菌感染
                1.2.4 感染雛雞的多肽治療
                1.2.5 雛雞沙門氏菌感染的病理學(xué)觀察
        2 結(jié)果
            2.1 沙門氏菌數(shù)量與其吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線
            2.2 雛雞感染沙門氏菌的臨床癥狀
            2.3 多肽對雛雞沙門氏菌攻毒的治療效果
            2.4 雛雞沙門氏菌感染后各器官的病理變化
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
全文總結(jié)
致謝
作者簡介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]淺談雞沙門氏菌病的綜合防治[J]. 邢錦梅.  農(nóng)技服務(wù). 2014(02)
[2]抗菌肽的來源及應(yīng)用[J]. 梁英.  動物營養(yǎng)學(xué)報. 2014(01)
[3]細(xì)菌內(nèi)毒素的生物危害性及其拮抗劑研究進(jìn)展[J]. 王紅芳,李菁,王明霞.  河北醫(yī)藥. 2011(17)
[4]動物源性抗菌肽抗菌機(jī)理的研究進(jìn)展[J]. 付登峰,胡建和,劉興友.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2011(09)
[5]雞源抗菌肽的研究進(jìn)展及展望[J]. 趙軍明,榮光,周漢林.  熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué). 2011(03)
[6]禽類β-防御素的研究進(jìn)展[J]. 洪勝輝,武艷軍,龔道清.  中國飼料. 2010(22)
[7]細(xì)菌素的合成與作用機(jī)制[J]. 吳清平,黃靜敏,張菊梅,莫樹平.  微生物學(xué)通報. 2010(10)
[8]抗菌肽與抗生素對革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌的體外協(xié)同抗菌效果研究[J]. 劉倚帆,徐良,朱海燕,張立可,汪以真.  動物營養(yǎng)學(xué)報. 2010(05)
[9]抗菌肽在抗腫瘤方面的研究進(jìn)展[J]. 胡榮貴,李改瑞,陸家海.  實(shí)用腫瘤雜志. 2010(02)
[10]抗菌肽BuforinⅡ衍生物與大腸桿菌基因組DNA的作用機(jī)制[J]. 郝剛,施用暉,唐亞麗,樂國偉.  微生物學(xué)報. 2010(03)

博士論文
[1]BuforinⅡ抗菌肽的分子設(shè)計(jì)及對DNA作用抑菌機(jī)理研究[D]. 郝剛.江南大學(xué) 2009

碩士論文
[1]雜合抗菌肽CL23和LH28的分子設(shè)計(jì)與表達(dá)[D]. 董天堂.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2008



本文編號：3031728