本實(shí)驗(yàn)旨在獲得帶有增強(qiáng)型綠色熒光蛋白及表達(dá)豬ACRBP基因的pIRES2-EGFP-ACRBP真核表達(dá)載體和CHO細(xì)胞株,并且檢測豬睪丸、附睪、前列腺、尿道球腺、精子、精清、性成熟母豬卵巢和輸卵管中ACRBP蛋白的表達(dá)情況。本實(shí)驗(yàn)通過基因克隆的方法獲得豬源ACRBP基因,并構(gòu)建了pIRES2-EGFPACRBP真核表達(dá)載體,經(jīng)過雙酶切、測序鑒定后,轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞,通過綠色熒光觀察、RT-PCR和Westernblot檢驗(yàn)ACRBP表達(dá)載體在CHO癌細(xì)胞株中的表達(dá)情況。結(jié)果顯示:ACRBP蛋白在睪丸、附睪、前列腺、尿道球腺、卵巢、輸卵管、精子中有條帶,而在豬的精清中沒有條帶,轉(zhuǎn)入CHO細(xì)胞后可觀察到帶熒光的陽性質(zhì)粒,通過RT-PCR和Western-blot檢測到ACRBP在CHO中得到了表達(dá)。 

【文章來源】：中國畜牧雜志. 2020,56(09)北大核心

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

pIRES2-EGFP-ACRBP重組質(zhì)粒酶切回收PCR產(chǎn)物（A）電泳圖和pIRES2-EGFP-ACRBP重組質(zhì)粒PCR產(chǎn)物（B）電泳圖

RT-PCR結(jié)果圖

以沒有經(jīng)過轉(zhuǎn)染重組表達(dá)載體的CHO細(xì)胞為對照組，檢測到轉(zhuǎn)染過重組質(zhì)粒pIRES2-EGFP-ACRBP的CHO細(xì)胞中在32 ku處有條帶，其大小與預(yù)期相符合，在未經(jīng)過轉(zhuǎn)染的陰性對照CHO癌細(xì)胞在32 ku大小處無條帶，說明ACRBP基因在蛋白水平上表達(dá)（圖8）。圖8 Western blot檢測重組表達(dá)載體在CHO中的表達(dá)結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3030971