奶牛乳房炎（Bovine mastitis）是由于奶牛乳腺組織被外界因素所刺激而發(fā)生的炎癥反應(yīng)。奶�；既榉垦缀�,乳腺組織遭到損傷,導(dǎo)致組織病變、乳中體細(xì)胞數(shù)增加、產(chǎn)奶量和牛奶品質(zhì)下降。由于病原微生物是導(dǎo)致奶牛乳房炎的最主要因素,因此,本研究針對(duì)金黃色葡萄球菌性奶牛乳房炎,在本實(shí)驗(yàn)室過(guò)去的研究基礎(chǔ)上,自制了CP8-FnBPB-ClfA金黃色奶牛乳房炎疫苗,并通過(guò)兔乳房炎模型對(duì)佐劑進(jìn)行篩選,確定其免疫途徑后,與CP8-FnBPB-ClfA配合免疫奶牛,評(píng)價(jià)其免疫效果,結(jié)果如下：1.在以前的基礎(chǔ)上,提取出已被本實(shí)驗(yàn)室鑒定為血清8型S.aureus的莢膜多糖1.7970g,將含F(xiàn)nBPB-ClfA融合蛋白的質(zhì)粒在大腸桿菌中表達(dá)并將其與CP8偶聯(lián),得到CP8-FnBPB-ClfA。2.以CP8-FnBPB-ClfA為疫苗,分別配合弗氏佐劑、鋁膠鹽水佐劑、脂質(zhì)體佐劑和大腸桿菌不耐熱腸毒素B（LTB）佐劑,對(duì)新西蘭大耳白兔進(jìn)行免疫,在免疫后不同時(shí)期,通過(guò)間接ELISA法和Western blot對(duì)各組兔血清中的抗體進(jìn)行監(jiān)測(cè),評(píng)價(jià)體液免疫效果；通過(guò)檢測(cè)Th1/Th2類(lèi)細(xì)胞因子水平檢測(cè)及T淋巴細(xì)胞增殖試... 

【文章來(lái)源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁(yè)數(shù)】：97 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
插圖和附表清單
縮略語(yǔ)表
1 引言
    1.1 奶牛乳房炎的分類(lèi)
        1.1.1 臨床型奶牛乳房炎
        1.1.2 隱性奶牛乳房炎
    1.2 金黃色葡萄球菌研究進(jìn)展
        1.2.1 生物學(xué)特性
        1.2.2 金黃色葡萄球菌性奶牛乳房炎致病機(jī)制研究進(jìn)展
            1.2.2.1 金黃色葡萄球菌對(duì)奶牛乳腺的感染
            1.2.2.2 金黃色葡萄球菌的毒力因子
            1.2.2.3 金黃色葡萄球菌與宿主的相互作用
    1.3 金黃色葡萄球菌疫苗研究進(jìn)展
        1.3.1 滅活疫苗
        1.3.2 以金黃色葡萄球菌莢膜多糖為靶位的疫苗
            1.3.2.1 莢膜多糖研究概況
            1.3.2.2 莢膜多糖的血清型
            1.3.2.3 莢膜多糖的生化組成
            1.3.2.4 莢膜多糖疫苗
        1.3.3 以金黃色葡萄球菌粘附素為靶位的疫苗
            1.3.3.1 粘附素研究概況
            1.3.3.2 纖連素結(jié)合蛋白
            1.3.3.3 凝集因子A
            1.3.3.4 粘附素疫苗
    1.4 免疫佐劑研究進(jìn)展
        1.4.1 弗氏佐劑
        1.4.2 鋁膠鹽水佐劑
        1.4.3 脂質(zhì)體佐劑
        1.4.4 大腸桿菌不耐熱腸毒素B佐劑
    1.5 金黃色葡萄球菌性乳房炎疫苗對(duì)本動(dòng)物免疫研究概況
    1.6 選題的目的和意義
2 研究一 金黃色葡萄球菌血清8型CP的提取和純化
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 菌種
        2.1.2 培養(yǎng)基及主要試劑
        2.1.3 主要儀器
    2.2 試驗(yàn)流程
    2.3 試驗(yàn)方法
        2.3.1 S.aureus的活化與培養(yǎng)
        2.3.2 S.aureus的處理
        2.3.3 莢膜多糖的提取
        2.3.4 莢膜多糖粗提物含量的測(cè)定
        2.3.5 莢膜多糖粗提物的純化
    2.4 試驗(yàn)結(jié)果
        2.4.1 S.aureus的活化與培養(yǎng)
        2.4.2 莢膜多糖的提取
        2.4.3 莢膜多糖粗提物含量的測(cè)定
        2.4.4 莢膜多糖粗提物的純化
    2.5 討論
    2.6 小結(jié)
3 研究二 FnBPB-ClfA融合蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)以及與CP8的偶聯(lián)
    3.1 試驗(yàn)材料
        3.1.1 菌種
        3.1.2 培養(yǎng)基及主要試劑
        3.1.3 試驗(yàn)主要儀器
    3.2 試驗(yàn)流程
    3.3 試驗(yàn)方法
        3.3.1 FnBPB-ClfA融合蛋白的表達(dá)
        3.3.2 SDS-PAGE分析
+親和柱的再生">        3.3.3 Ni⁺親和柱的再生
        3.3.4 融合蛋白的純化
        3.3.5 血清8型莢膜多糖的活化衍生
        3.3.6 血清8型莢膜多糖與融合蛋白的偶聯(lián)
    3.4 試驗(yàn)結(jié)果
        3.4.1 FnBPB-ClfA融合蛋白的表達(dá)及純化
        3.4.2 血清8型莢膜多糖與融合蛋白的偶聯(lián)
    3.5 討論
    3.6 小結(jié)
4 研究三 CP8-FnBPB-ClfA配合不同佐劑免疫學(xué)特性的研究
    4.1 試驗(yàn)材料
        4.1.1 陽(yáng)性血清
        4.1.2 主要試劑
    4.2 試驗(yàn)流程
    4.3 試驗(yàn)方法
        4.3.1 CP8-FnBPB-ClfA的制備
        4.3.2 弗氏佐劑與CP8-FnBPB-ClfA混合疫苗的制備
        4.3.3 鋁膠鹽水佐劑與CP8-FnBPB-ClfA混合疫苗的制備
        4.3.4 脂質(zhì)體佐劑與CP8-FnBPB-ClfA混合疫苗的制備
        4.3.5 LTB與CP8-FnBPB-ClfA混合疫苗的制備
        4.3.6 與CP8-FnBPB-ClfA偶聯(lián)物配合免疫最佳佐劑的篩選
            4.3.6.1 動(dòng)物的處置
            4.3.6.2 兔血清中CP8,FnBPB,ClfA,FnBPB-ClfA和CP8-FnBPB-ClfA抗體的測(cè)定
            4.3.6.3 兔血清中IgG含量的測(cè)定
            4.3.6.4 Western blot鑒定
            4.3.6.5 兔血清中總IgG含量及Th1/Th2細(xì)胞因子水平測(cè)定
            4.3.6.6 T淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)
        4.3.7 最佳免疫部位的篩選
            4.3.7.1 動(dòng)物的分組與處置
            4.3.7.2 不同部位免疫動(dòng)物時(shí)血清中總IgG含量及Th1/Th2細(xì)胞因子水平測(cè)定
        4.3.8 攻毒試驗(yàn)
    4.4 試驗(yàn)結(jié)果
        4.4.1 與CP8-FnBPB-ClfA配合免疫最佳佐劑的篩選
            4.4.1.1 兔血清中CP8,FnBPB,ClfA,FnBPB-ClfA和CP8-FnBPB-ClfA抗體的測(cè)定
            4.4.1.2 兔血清中IgG含量的測(cè)定
            4.4.1.3 Western blot鑒定
            4.4.1.4 兔血清中總IgG含量測(cè)定
            4.4.1.5 兔血清中Th1/Th2細(xì)胞因子水平測(cè)定
            4.4.1.6 T淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)
        4.4.2 最佳免疫部位的篩選
            4.4.2.1 不同部位免疫動(dòng)物時(shí)血清中總IgG含量測(cè)定
            4.4.2.2 不同部位免疫動(dòng)物時(shí)血清中Th1/Th2細(xì)胞因子水平測(cè)定
        4.4.3 攻毒試驗(yàn)
    4.5 討論
    4.6 小結(jié)
5 研究四 CP8-FnBPB-ClfA偶聯(lián)物配合ALUM佐劑對(duì)本動(dòng)物免疫效果的研究
    5.1 主要試劑及儀器
    5.2 試驗(yàn)流程
    5.3 試驗(yàn)方法
        5.3.1 抗原的制備
            5.3.1.1 CP8-FnBPB-ClfA的制備
            5.3.1.2 ALUM佐劑與CP8-FnBPB-ClfA混合疫苗的制備
        5.3.2 動(dòng)物分組與處置
        5.3.3 牛乳中體細(xì)胞數(shù)測(cè)定
        5.3.4 牛乳中細(xì)菌的分離鑒定
        5.3.5 牛血清中CP8-FnBPB-ClfA抗體水平測(cè)定
        5.3.6 奶牛血清中IgG、IgA含量及牛乳中IgG含量測(cè)定
        5.3.7 數(shù)據(jù)分析
    5.4 試驗(yàn)結(jié)果
        5.4.1 牛乳中體細(xì)胞數(shù)測(cè)定
        5.4.2 牛乳中細(xì)菌的分離鑒定
        5.4.3 牛血清中CP8-FnBPB-ClfA抗體測(cè)定
        5.4.4 牛血清中IgG及IgA含量測(cè)定
        5.4.5 牛乳中IgG含量測(cè)定
    5.5 討論
    5.6 小結(jié)
6 總體討論
7 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3028649