A型塞內(nèi)卡病毒（SenecavirusA,SVA）是小核糖核酸病毒科,Senecavirus屬的唯一成員。SVA感染引起新生仔豬跛行、嗜睡、厭食、急性死亡及特征性水皰病癥狀。目前已有加拿大、哥倫比亞、美國(guó)、巴西、中國(guó)、越南、泰國(guó)等多個(gè)國(guó)家報(bào)道了 SVA疫情。2015年以來,我國(guó)廣東、湖北、福建、湖北等14個(gè)省份相繼暴發(fā)SVA疫情。研究表明目前國(guó)內(nèi)流行的SVA毒株正在發(fā)生變異,部分毒株已發(fā)生重組。最新研究發(fā)現(xiàn)SVA似乎獲得了比以前更強(qiáng)的致病性和傳播能力。然而,中國(guó)SVA毒株的流行病學(xué)信息還有待補(bǔ)充,特別是SVA致病性毒株的信息仍然非常缺乏。因此,本研究分離鑒定了兩株中國(guó)的SVA毒株,從親緣關(guān)系、基因組水平以及致病性上分析毒株的差異。制備了能夠特異性識(shí)別VP3蛋白的單克隆抗體,并鑒定其抗原表位,為SVA新型診斷試劑的研制和該病毒的有關(guān)研究工作提供了有力的免疫學(xué)工具。具體內(nèi)容如下:1 A型塞內(nèi)卡病毒的分離鑒定、基因組測(cè)序及遺傳進(jìn)化分析本研究對(duì)2017～2018年來自廣東若干生豬養(yǎng)殖場(chǎng)的疑似病料進(jìn)行病毒分離與全基因組測(cè)序,并將分離的2株SVA毒株命名為GD04/2017和GD-S5/2018（... 

【文章來源】：揚(yáng)州大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：95 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１?ＳＶＡ病毒粒子結(jié)構(gòu)示圖與基因組結(jié)構(gòu)圖ｍ??

?第一章Ａ型塞內(nèi)卡病毒的分離鑒定及遺傳進(jìn)化分析???離心ｌｍｉｎ，檢測(cè)并記錄質(zhì)粒的濃度。??１．１５．７?ＰＣＲ鑒定重組質(zhì)粒??以提取的重組質(zhì)粒為模板進(jìn)行ＰＣＲ鑒定，具體反應(yīng)體系及程序參考１．７，引物參??考表１－７；通過１％瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)ＰＣＲ結(jié)果。經(jīng)ＰＣＲ鑒定正確的質(zhì)粒送到南京??擎科生物科技有限公司進(jìn)行測(cè)序。??１．１５．７序列比對(duì)與基因組分析??將ＳＶＡ毒株的ＯＲＦ與ＶＰ１基因分別與ＧｅｎＢａｎｋ的其他典型ＳＶＡ毒株比對(duì)，利??用＼＾０八７．０版通過最大似然法建立系統(tǒng)發(fā)育樹。將００－５５／２０１８、０００４／２０丨７、美國(guó)??致病毒株ＳＶＡ?ＳＤ１５－２６和原型毒株ＳＶＶ－００１毒株進(jìn)行ＯＲＦ基因組和多肽序列的分析??比較，標(biāo)注各毒株之間具有差異的氨基酸，最后統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)。??２結(jié)果??２．１樣品的病原檢測(cè)??２０１７－２０１８年，從廣東某些豬場(chǎng)采集若干份水皰病料，通過對(duì)病料進(jìn)行研磨處理、??提取ＲＮＡ及反轉(zhuǎn)錄后，設(shè)計(jì)兩對(duì)ＳＶＡ基因特異性引物進(jìn)行病原檢測(cè)，ＲＴ－ＰＣＲ結(jié)果顯??示，其中兩份采集的病料ＳＶＡ陽性，擴(kuò)增片段Ｐ、Ｑ的大小與預(yù)期相符。??Ｍ?１?２?３?４??誦國(guó)??＂ｍｌ??５００?Ｃ??２５０??圖１－１樣品的ＰＣＲ鑒定結(jié)果??Ｆｉｇｕｒｅ?１－１?Ｓａｍｐｌｅ?ＰＣＲ?ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｒｅｓｕｌｔｓ??Ｍａｒｋｅｒ：５０００ｂｐ?ＤＮＡ?ｌａｄｄｅｒ?ｍａｒｋｅｒ??１：病料①Ｐ片段５８３ｂｐ?２：病料①Ｑ片段１６５３ｂｐ??３：病料②Ｐ片段５８３ｂｐ?４：病料②Ｑ片段１６５３ｂｐ??２３??

?第一章Ａ型塞內(nèi)卡病毒的分離鑒定及遺傳進(jìn)化分析???１２－｜??Ｈ?／??３－?ｙ?＾?ＧＤ０４／２０１７??２＇?▲?￣ｍｒ?ＧＤ－Ｓ５／２０１８??１－??０?＾?Ｉ?Ｉ?ｉ?Ｉ?Ｉ?■＂?ｉ??６?１２?２４?３６?４８?６０??Ｈｏｕｒｓ?ｐｏｓｔ?ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ??圖１－２分病毒生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)曲線??Ｆｉｇ．?１－２?Ｖｉｒｕｓ?ｇｒｏｗｔｈ?ｋｉｎｅｔｉｃ?ｃｕｒｖｅ??２．７病毒空斑??病毒空斑實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，兩個(gè)毒株具有相似的空斑形狀。??ＧＤ－Ｓ５／２０１８?ＧＤ０４／２０１７?ＳＴ－Ｒ??圖１－３病毒空斑實(shí)驗(yàn)??Ｆｉｇ．?１－３?Ｖｉｒｕｓ?ｐｌａｑｕｅ?ｔｅｓｔ??２．８間接免疫熒光??２５??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]The Distribution of Different Clades of Seneca Valley Viruses in Guangdong Province,China[J]. Pan Chen,Fan Yang,Weijun Cao,Huanan Liu,Keshan Zhang,Xiangtao Liu,Zhiwen Xu,Zixiang Zhu,Haixue Zheng.  Virologica Sinica. 2018(05)
[2]塞尼卡谷病毒重組酶聚合酶擴(kuò)增技術(shù)（RPA）實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)方法的建立[J]. 樊曉旭,哈登楚日亞,王英麗,王姣,劉春菊,遲田英,趙永剛,張志誠(chéng),吳曉東,王志亮.  中國(guó)動(dòng)物檢疫. 2017(08)
[3]B細(xì)胞抗原表位的研究進(jìn)展及其應(yīng)用[J]. 郭春艷,趙向絨,胡軍.  生物技術(shù)通訊. 2013(02)
[4]對(duì)表位生物學(xué)研究的認(rèn)識(shí)和體會(huì)[J]. 朱錫華,吳玉章.  上海免疫學(xué)雜志. 1998(01)

碩士論文
[1]J亞群禽白血病病毒抗原/抗體檢測(cè)體系的建立[D]. 王言明.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014



本文編號(hào)：3027022