雞球蟲病由一種或多種艾美耳球蟲引起的危害養(yǎng)雞業(yè)最嚴(yán)重的腸道寄生蟲病,可導(dǎo)致體重顯著下降、營養(yǎng)不良、失血、脫水和對其他疾病的易感性增加,每年造成世界范圍內(nèi)的經(jīng)濟(jì)損失高達(dá)30億美元。先天性免疫系統(tǒng)是抵抗微生物入侵的第一道防線,其中巨噬細(xì)胞在先天性免疫和適應(yīng)性免疫中都發(fā)揮重要作用。巨噬細(xì)胞可被多種細(xì)胞因子和病原相關(guān)分子模式如脂多糖、CpG DNA信號激活,從而啟動先天免疫反應(yīng)。本研究將雞巨噬細(xì)胞（HD11）作為柔嫩艾美耳球蟲（E.tenella）子孢子的宿主細(xì)胞,研究體外E.tenella子孢子在雞巨噬細(xì)胞（HD11）中的發(fā)育情況以及巨噬細(xì)胞（HD11）產(chǎn)生的抗感染免疫。具體內(nèi)容如下:1.柔嫩艾美耳球蟲子孢子的HD11細(xì)胞體外培養(yǎng)。將E.tenella子孢子接種HD11巨噬細(xì)胞,制備細(xì)胞爬片,用吉姆薩染色顯微鏡觀察,結(jié)果發(fā)現(xiàn)E.tenella子孢子成功入侵HD11細(xì)胞,但并沒有發(fā)育跡象,體外培養(yǎng)至50 h時巨噬細(xì)胞裂解,子孢子游離在培養(yǎng)基中并且活力良好。2.分別設(shè)置實驗組,活子孢子感染HD11細(xì)胞組;空白對照組,將子孢子懸液換成相等體積的培養(yǎng)基;陽性對照組,將子孢子懸液換成試劑盒中陽性對照試... 

【文章來源】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)甘肅省

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Summary
縮略詞英漢對照表
第一章 緒論
    1 前言
        1.1 雞球蟲病及防治現(xiàn)狀
            1.1.1 雞球蟲病病原
            1.1.2 雞球蟲生活史
            1.1.3 雞球蟲病防治現(xiàn)狀及最新探索
        1.2 雞球蟲對宿主細(xì)胞的入侵
        1.3 雞球蟲細(xì)胞培養(yǎng)的研究現(xiàn)狀及進(jìn)展
        1.4 雞免疫系統(tǒng)
            1.4.1 B淋巴細(xì)胞
            1.4.2 T淋巴細(xì)胞
            1.4.3 巨噬細(xì)胞
                1.4.3.1 雞巨噬細(xì)胞來源
                1.4.3.2 巨噬細(xì)胞與寄生蟲的相互作用
            1.4.4 NK細(xì)胞
        1.5 抗艾美耳球蟲的先天性免疫反應(yīng)和獲得性免疫反應(yīng)
            1.5.1 抗體反應(yīng)
            1.5.2 細(xì)胞免疫
            1.5.3 細(xì)胞因子及 NO 在抗球蟲感染中的作用
        1.6 本研究的目的和意義
第二章 柔嫩艾美耳球蟲子孢子在HD11細(xì)胞中的體外培養(yǎng)
    1 材料與方法
        1.1 材料
            1.1.1 雞巨噬細(xì)胞和蟲株
            1.1.2 實驗動物
            1.1.3 主要試劑
            1.1.4 主要儀器設(shè)備
        1.2 方法
            1.2.1 雞球蟲的復(fù)壯與傳代
            1.2.2 球蟲卵囊的收集與孢子化
            1.2.3 無菌子孢子的提取
            1.2.4 HD11細(xì)胞的復(fù)蘇與培養(yǎng)
            1.2.5 柔嫩艾美耳球蟲在HD11細(xì)胞中的體外培養(yǎng)
    2 結(jié)果
        2.1 柔嫩艾美耳球蟲在HD11細(xì)胞中體外培養(yǎng)的研究
            2.1.1 孢子化卵囊和子孢子的收集與純化
            2.1.2 柔嫩艾美耳球蟲在HD11細(xì)胞中的培養(yǎng)
            2.1.3 柔嫩艾美耳球蟲在CEK細(xì)胞中的培養(yǎng)
            2.1.4 接種時間的確定
            2.1.5 接種劑量的確定
    3 討論
第三章 柔嫩艾美耳球蟲感染HD11細(xì)胞免疫反應(yīng)的檢測
    1 材料與方法
        1.1 材料
            1.1.1 雞巨噬細(xì)胞和蟲株
            1.1.2 實驗動物
            1.1.3 主要試劑
            1.1.4 主要儀器設(shè)備
        1.2 實驗方法
            1.2.1 雞球蟲的復(fù)壯與傳代
            1.2.2 球蟲卵囊的收集與孢子化
            1.2.3 無菌子孢子的提取
            1.2.4 HD11細(xì)胞的復(fù)蘇與培養(yǎng)
            1.2.5 柔嫩艾美耳球蟲感染HD11 細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)NO和 ROS的檢測
            1.2.6 細(xì)胞因子IL-1β、IL-6、IL-10、IL-12p40、IFN-γ、TNF-α、iNOS和IRF7表達(dá)水平檢測
    2 結(jié)果
        2.1 柔嫩艾美耳球蟲子孢子感染HD11 細(xì)胞后細(xì)胞內(nèi)NO和 ROS的檢測
        2.2 柔嫩艾美耳球蟲感染相關(guān)的8種宿主細(xì)胞因子表達(dá)水平檢測
    3 討論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡介
導(dǎo)師簡介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]柔嫩艾美耳球蟲在雞胚盲腸上皮細(xì)胞中體外培養(yǎng)營養(yǎng)條件的研究[J]. 古少鵬,侯金環(huán),陳趙英,李寶鈞,鄭明學(xué).  畜牧獸醫(yī)學(xué)報. 2010(12)
[2]雞球蟲苗（LCV-2號）安全性和免疫效果研究[J]. 閆鴻斌,田廣孚,賈萬忠,林青,李輝,侯俊玲,鄭亞東,程曉紅,宋玉霞,才學(xué)鵬.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報. 2007(05)
[3]NO在雛雞球蟲感染過程中的作用[J]. 申兆菊,朱蓓蕾,蔣金書.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報. 2002(04)
[4]雞球蟲耐藥性的研究進(jìn)展[J]. 馬立農(nóng),陳杖榴.  中國獸藥雜志. 1999(04)
[5]柔嫩艾美耳球蟲和堆型艾美耳球蟲在雞胚培養(yǎng)和雞腎細(xì)胞中的發(fā)育[J]. 蔣金書,胡景輝.  中國農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 1998(S2)
[6]不同培養(yǎng)基成分在球蟲細(xì)胞培養(yǎng)中的作用[J]. 謝宏料,謝明權(quán),吳惠賢,彭新宇,溫列娜,張健騑.  動物學(xué)報. 1996(03)
[7]脆弱艾美耳球蟲（Eimeria tenella）細(xì)胞培養(yǎng)的觀察[J]. 韓志華,李少泉,張惠英,史天衛(wèi).  畜牧與獸醫(yī). 1985(02)

博士論文
[1]柔嫩艾美耳球蟲DF-1細(xì)胞培養(yǎng)體系的建立及EtSerpin，EtAMA1基因功能的初步研究[D]. 姜連連.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2011



本文編號：3026355