豬病毒性腹瀉是一種接觸性的腸道傳染病,其臨床癥狀為嘔吐,腹瀉和脫水等。其病原包括豬博卡病毒（Porcine Bocavirus,PBCo V）、諾如病毒（Norovirus,No V）、豬Delta冠狀病毒（Porcine Delta Coronavirus,PDCo V）、豬流行性腹瀉病毒（Porcine Variant Diarrhea Virus,PEDV）、輪狀病毒（Rotavirus,RV）和豬傳染性腸胃炎病毒（Porcine Infectious Gastroenteritis Virus,TGEV）等六種病毒,該類病毒引起的臨床癥狀、流行病學(xué)規(guī)律和病理變化非常相似,特別是豬性腹瀉病毒,其變異毒株不斷出現(xiàn),防控技術(shù)要求更高,臨床診斷時不易區(qū)分其病原體,因此建立一種同一反應(yīng)、快速、靈敏的檢測方法區(qū)分將有利于該類疾病的防控。本研究利用多重連接探針擴增技術(shù)（Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification,MLPA）和熒光定量RT-PCR技術(shù),分別建立區(qū)分6種病毒性腹瀉病原體的MLPA檢測方法和豬流行性腹瀉變異毒株與疫苗毒株的熒光定... 

【文章來源】：浙江農(nóng)林大學(xué)浙江省

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

MLPA基礎(chǔ)探針構(gòu)造Figure.1.1MLPAbasicprobeconstruction

25圖 1.2 6 種豬腹瀉病毒重組表達質(zhì)粒Figure.1.2 Six porcine diarrhea virus recombinant expression plasmid1.6.1 E.coli 感受態(tài)細胞制備（1）準備適量的 1.5 mL 離心管，120℃高壓滅菌后，放置烘箱 60℃烘干，置于-80℃冷藏備用。準備多個 250 mL 錐形離心管，自來水洗滌干凈后，再用二級水沖洗干凈，高壓滅菌冷藏備用；（2）同時于-80℃冰箱中取 E.coli，在 LB 平板上劃線復(fù)蘇 E.coli，平板倒置于 37℃靜置 12-16 h 培養(yǎng)；（3）從平板上挑出數(shù)個單個菌落接種于 10 mL 的 LB 液體培養(yǎng)基中，放入 37℃

品為陽性對照，正常的無菌水為陰性對照，對52份臨性的PEDV病毒13份，疑似感染豬病毒性腹瀉疾病小腸組瀉疾病的鼻咽拭子38份）進行檢測，對方法的檢測結(jié)果時熒光定量PCR的檢測方法及病毒鑒定分離結(jié)果進行比果準品的制備與驗證中的6株病毒提取核酸，然后進行PCR擴增（見圖1.3），，連接，轉(zhuǎn)化，搖菌，提取質(zhì)粒進行酶切和測序鑒定段的重組質(zhì)粒，經(jīng)多功能酶標儀測定濃度用無菌水進行×10-10ng /μL的質(zhì)粒標準品。豬病毒性腹瀉疾病病原核酸檢測技術(shù)的研究

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3025515